【ScienCell】人脉络丛内皮细胞(HCPEC)产品使用攻略
人脉络丛内皮细胞培养不成功、实验做不出来怎么办？新手小白迫切求助，希望各位前辈在文章下方留言，分享自己的经验，为小白们答疑解惑！
人脉络丛内皮细胞
（ HCPEC）
脉络丛位于脑室中，是产生脑脊液（CSF）的场所，参与脑的发育、成熟、衰老、内分泌调节、神经免疫相互作用以及某些神经退行性疾病的发病机制。脉络丛由一层上皮细胞包围的毛细血管网络组成，共同形成了血-脑脊液屏障。脉络丛中的毛细血管含有一层内皮细胞，中间有“孔”打断，孔之间有一个隔膜，隔开了腔内和间质空间。研究表明，脉络丛上皮和内皮细胞具有代谢功能，脉络丛内皮细胞高表达Glut1葡萄糖转运蛋白。HCPEC的vWF/Factor VIII和CD31(PECAM1)的特异性抗体免疫荧光染色呈阳性。
培养方式
HCPEC是非常敏感的细胞，在培养中不会多次增殖。在解冻细胞之前，应组织好实验。解冻后尽早使用HCPEC进行实验，并尽量减少扩增。如果不可避免需要传代，务必特别小心地遵循以下说明，并建议细胞仅传代一次。
培养瓶：纤连蛋白（Bovine Plasma Fibronectin, 2 µg/cm2）包被培养瓶。
培养基：HCPEC用提供的ECM完全培养基（包含基础培养基、1% ECGS和1% P/S）培养。
操作步骤：
1) 包被纤连蛋白（2 µg/cm2）培养瓶的准备（T-75培养瓶）：将10 mL无菌的Dulbecco's磷酸盐缓冲盐（DPBS）与150 µL纤连蛋白原液混匀后加入到T-75培养瓶中，将培养瓶放置在37°C的孵育箱中过夜（或至少2小时）。在铺细胞前将未凝固纤连蛋白溶液吸出（可重复使用2次），加入20 mL ECM完全培养基（基础培养基、ECGS和P/S按比例混合配制）。
2) 吸出未凝固的纤连蛋白溶液，T-75中加入20 mL的完全培养基，将解冻后的细胞小心加入到培养基中，十字交叉法轻柔平晃培养瓶。（注：不建议在解冻后对细胞进行稀释和离心，因为这些与培养物中残留DMSO的作用相比，这些作用对细胞的损伤更大；将HCPEC置于纤连蛋白包被的培养瓶中，促进生长同样重要。）
换液：培养开始后16小时内不要干扰培养。次日更换培养液，去除残留的DMSO和未贴壁细胞。之后每三天更换一次培养基，直到培养达到大约70%的密度。一旦培养达到大约70%的密度，每隔一天更换一次培养基，直到培养达到大约90%的密度。
传代：当细胞密度达到90%时进行传代。
1) 将T/E、包被培养瓶、DPBS、培养基提前置于室温平衡（不建议37℃加热）。
2) 弃除旧培养基，并用DPBS清洗细胞后吸除加入8 mL DPBS和2 mL 0.05% T/E solution 轻柔晃动培养瓶后放入37℃培养箱（注：原代细胞传代时请勿使用未稀释的胰蛋白酶），一段时间后镜下观察，待细胞完全变圆、脱落，轻轻拍打底部和侧面，加入2 mL FBS（#0500），将细胞悬液转移至15 mL离心管中，1000 rpm离心5 min，用新培养基重悬细胞沉淀后计数，根据7000-8000 cells/cm2的密度传代至预先用纤连蛋白包被的培养瓶中。
生长条件：在CO2浓度为5%，温度为37℃，相对湿度（RH）为95%的细胞培养箱中培养。
表1 HCPEC培养材料
参考文献
[1] Strazielle N, Ghersi-Egea JF. (2000) “Choroid plexus in the central nervous system: biology and physiopathology.” J Neuropathol Exp Neurol. 59: 561-74.
[2] Thomas SA, Bye A, Segal MB. (2001) “Transport Characteristics of the Anti-human Immunodeficiency Virus Nucleoside Analog, Abacavir, into Brain and Cerebrospinal Fluid.” J Pharmacol Exp Ther. 298: 947-53.
[3] Cornford EM, Hyman S, Cornford ME, Damian RT. (1998) “Glut1 glucose transporter in the primate choroids plexus endothelium.” J Neuropathol Exp Neurol. 57: 404-11
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