【ScienCell】人脉络丛上皮细胞（HCPEpiC）产品使用攻略
人脉络丛上皮细胞培养不成功、实验做不出来怎么办？新手小白迫切求助，希望各位前辈在文章下方留言，分享自己的经验，为小白们答疑解惑！
人脉络丛上皮细胞
（ HCPEpiC）
脉络丛上皮细胞（CPEpiC）通过相邻细胞间的连接复合物，在限制分子和离子在脑和脑脊液之间的通透性方面起关键作用。CPEpiC还具有特殊的细胞结构，通道和转运蛋白的表达非常适合脑脊液的分泌。研究表明，CPEpiC合成和分泌各种具有营养益处的生长因子和肽，通过自分泌和旁分泌机对中枢神经系统的缺血和创伤性损伤进行修复反应。HCPEpiC培养可作为研究血-脑脊液屏障交换过程和脑脊液稳态的优良模型。HCPEpiC的cytokeratin-18和cytokeratin-19的特异性抗体免疫荧光染色呈阳性。
培养方式
培养瓶：PLL包被的培养瓶。
培养基：HCPEpiC在提供的EpiCM完全培养基（包含基础培养基、2% FBS、1% EpiCGS和1%P/S）中培养。
操作步骤：
1) PLL（2 μg/cm2）培养瓶（T-75培养瓶）的准备：将10 mL无菌水加入到T-75培养瓶中，加入15 μL PLL，轻轻吹匀后将培养瓶放置在37°C的孵育箱中过夜（或至少1小时）。
2）无菌水清洗包被多聚L -赖氨酸的T-75 2次，加入20 mL EpiCM完全培养基（基础培养基、FBS、EpiCGS和P/S按比例混合配制），将解冻后的HCPEpiC加入至包被的T-75中，十字交叉法轻柔摇晃培养瓶使细胞分布均匀，将培养瓶放入细胞培养箱中。（注：不建议在解冻后稀释和离心细胞，因为这些操作对细胞的伤害比培养中残留的二甲基亚砜（DMSO）的影响更大。同时，细胞在PLL包被培养瓶中有助于促进细胞附着。）
换液：为了获得最佳结果，在培养开始后至少16小时内不要干扰培养。第二天更换培养基，以去除残留的二甲基亚砜和未附着的细胞，之后每隔三天更换一次培养基，直到培养达到约70%的密度，一旦培养达到约70%的密度，每隔一天更换一次培养基，直到培养达到约90%的密度。
传代：当细胞密度达到90%时进行传代。
1) 将T/E、DPBS、培养基提前置于室温平衡（不建议37℃加热）。
2) 弃除旧培养基，并用DPBS清洗细胞后吸除加入8 mL 0.05% T/E solution 轻柔晃动培养瓶后放入37℃培养箱，一段时间后镜下观察，待细胞完全变圆、脱落，轻轻拍打底部和侧面，加入4 mL FBS（#0500）终止消化，将细胞悬液转移至15 mL离心管中，1000 rpm离心5 min，用新培养基重悬细胞沉淀后计数，根据6000 cells/cm2的密度传代至预先用PLL包被的培养瓶中。
生长条件：在CO2浓度为5%，温度为37℃，相对湿度（RH）为95%的细胞培养箱中培养。
表1 HCPEpiC培养材料
参考文献
[1] Brown PD, Davies SL, Speake T, Millar ID. (2004) “Molecular mechanisms of cerebrospinal fluid production.” Neuroscience. 129: 957-70.
[2] Johanson CE, Palm DE, Primiano MJ, McMillan PN, Chan P, Knuckey NW, Stopa EG. (2000) “Choroid plexus recovery after transient forebrain ischemia: role of growth factors and other repair mechanisms.” Cell Mol Neurobiol.20: 197-216.
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