【ScienCell】人脑血管周细胞（HBVP）产品使用攻略

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小白求助前辈指路

人脑血管周细胞培养不成功、实验做不出来怎么办？新手小白迫切求助，希望各位前辈在文章下方留言，分享自己的经验，为小白们答疑解惑！

人脑血管周细胞

(HBVP)

血管周细胞是具有收缩能力的平滑肌样细胞，覆盖在微血管的非腔面表面上，常见毛细血管，并于在静脉曲张上最为丰富。血管周细胞的数量在不同组织和器官间存在高度的差异，并显示出功能上的异质性。脑血管周细胞在血脑屏障的形成和功能性、血管生成的调节、内皮细胞的存活以及细胞残留物的清除和吞噬等方面发挥着关键作用。由于与内皮细胞结构和血流密切相关，血管周细胞活性的过度或不足与多种病理条件有关，包括高血压、糖尿病、视网膜病变、阿尔茨海默病、多发性硬化症和中枢神经系统肿瘤形成。HBVP 的α-smooth muscle actin (α-SMA)、NG2、和PDGFR-β (platelet derived growth factor receptor-β)的特异性抗体免疫荧光染色呈阳性。

培养方式

培养瓶：PLL（多聚-L-赖氨酸）包被的培养瓶。

培养基：HBVP在用提供的PM完全培养基（包含基础培养基、2% FBS、1% PGS和1% P/S）中培养。

操作步骤：

1) 包被PLL（2 μg/cm²）培养瓶（T-75培养瓶）的准备：将10 mL无菌水加入到T-75培养瓶中，加入15 μLPLL原液，轻轻吹匀后将培养瓶放置在37°C的孵育箱中过夜（或至少1小时）。

2) 无菌水清洗包被PLL的T-75 2次，加入20 mL完全培养基，将解冻后的HBVP加入至包被的T-75中，十字交叉法轻柔摇晃培养瓶使细胞分布均匀，将培养瓶放入细胞培养箱中。（注：不建议在解冻后稀释和离心细胞，因为这些操作对细胞的伤害比培养中残留的二甲基亚砜（DMSO）的影响更大。同时，细胞在PLL包被培养瓶中有助于促进细胞附着。）

换液：为了获得最佳结果，在培养开始后至少16小时内不要干扰培养。第二天更换培养基，以去除残留的二甲基亚砜和未附着的细胞，之后每隔三天更换一次培养基，直到培养达到约70%的密度，一旦培养达到约70%的密度，每隔一天更换一次培养基，直到培养达到约90%的密度。

传代：当细胞密度达到90%-95%时进行传代。

1) 将T/E、DPBS、培养基提前置于室温平衡（不建议37℃加热）。

2) 弃除旧培养基，并用DPBS清洗细胞后吸除加入5 mL DPBS和5 mL 0.05% T/E solution 轻柔晃动培养瓶后放入37℃培养箱（注：原代细胞传代时请勿使用未稀释的胰蛋白酶），一段时间后镜下观察，待细胞完全变圆、脱落，轻轻拍打底部和侧面，加入2 mL FBS（#0500）终止消化，将细胞悬液转移至15 mL离心管中，1000 rpm离心5 min，用新培养基重悬细胞沉淀后计数，根据5000 cells/cm²的密度传代至预先用PLL包被的培养瓶中。

生长条件：在CO₂浓度为5%，温度为37℃，相对湿度（RH）为95%的细胞培养箱中培养。

表1 HBVP培养材料