【ScienCell】人施旺细胞（ HSC）产品使用攻略
人施旺细胞培养不成功、实验做不出来怎么办？新手小白迫切求助，希望各位前辈在文章下方留言，分享自己的经验，为小白们答疑解惑！
人施旺细胞
（ HSC）
Schwann细胞是神经嵴的衍生物，它们包裹和髓鞘化周围神经的轴突。每个Schwann细胞包裹在一个单独的周围轴突的轴突上，形成轴突的髓鞘。Schwann细胞在周围神经的发育、功能和再生中发挥重要作用。当一个轴突正在死亡时，围绕它的Schwann细胞帮助其消化，留下由连续的Schwann细胞形成的空通道，通过这个空通道，新的轴突可以从断裂的末端生长出来。周围神经中的Schwann细胞数量受到严格调控。多种生长因子如PDGF、FGF、神经生长因子等可刺激体外培养的Schwann的增殖。Schwann细胞为研究一些发育问题提供了一个相对简单、明确的哺乳动物模型。了解Schwann细胞的生物学功能对于神经病变和神经再生的背景具有重要作用，同时Schwann细胞及其前体可作为植入物以促进中枢神经系统修复，因此具有特殊的临床意义。HSC分离自人脊神经，其S100β特异性抗体免疫荧光染色呈阳性。
培养方式
培养瓶：PLL（多聚-L-赖氨酸）包被的培养瓶。
培养基：HSC用提供的SCM完全培养基（包含基础培养基、5% FBS、1%SCGS和1% P/S）培养。
操作步骤：
1) 包被PLL（2 μg/cm2）培养瓶（T-75培养瓶）的准备：将10 mL无菌水加入到T-75培养瓶中，加入15 μL PLL原液，轻轻吹匀后将培养瓶放置在37°C的孵育箱中过夜（或至少1小时）。
2) 无菌水清洗包被PLL的T-75 2次，加入20 mL完全培养基，将解冻后的HSC加入至包被的T-75中，十字交叉法轻柔摇晃培养瓶使细胞分布均匀，将培养瓶放入细胞培养箱中。（注：不建议在解冻后稀释和离心细胞，因为这些操作对细胞的伤害比培养中残留的二甲基亚砜（DMSO）的影响更大。同时，将细胞置于PLL涂层培养有助于促进细胞附着。）
换液：为了获得最佳结果，在培养开始后至少16小时内不要干扰培养。第二天更换培养基，以去除残留的二甲基亚砜和未附着的细胞，之后每隔三天更换一次培养基，直到培养达到约70%的密度，一旦培养达到约70%的密度，每隔一天更换一次培养基，直到培养达到约90%的密度。
传代：当细胞密度达到90%时进行传代。
1) 将T/E、DPBS、培养基提前置于室温平衡（不建议37℃加热）。
2) 弃除旧培养基，并用DPBS清洗细胞后吸除，加入5 mL DPBS和5 mL 0.05% T/E solution 轻柔晃动培养瓶后放入37℃培养箱，一段时间后镜下观察，待细胞完全变圆、脱落，轻轻拍打底部和侧面，加入2 mL FBS（#0500）终止消化，将细胞悬液转移至15 mL离心管中，1000 rpm离心5 min，用新培养基重悬细胞沉淀后计数，根据5000 cells/cm2的密度传代至预先用PLL包被的培养瓶中。
生长条件：在CO2浓度为5%，温度为37℃，相对湿度（RH）为95%的细胞培养箱中培养
表1 HSC培养材料
参考文献
[1] Jessen KR, Mirsky R. (1999) “Schwann cells and their precursors emerge as major regulators of nerve development.” Trends Neurosci. 22: 402-10.
[2] Syroid DE, Maycox PR, Burrola PG, Liu N, Wen D, Lee KF, Lemke G, Kilpatrick TJ. (1996) “Cell death in the Schwann cell lineage and its regulation by neuregulin.” Proc Natl Acad Sci USA. 93: 9229-34.
[3] Rahmatullah M, Schroering A, Rothblum K, Stahl RC, Urban B, Carey DJ. (1998) “Synergistic regulation of Schwann cells proliferation by heregulin and forskolin.” Mol Cell Biol. 18: 6245-52.
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