【ScienCell】人脑膜细胞（HMC）产品使用攻略
人脑膜细胞培养不成功、实验做不出来怎么办？新手小白迫切求助，希望各位前辈在文章下方留言，分享自己的经验，为小白们答疑解惑！
人脑膜细胞
（ HMC）
脑膜细胞环绕着大脑，并积极参与中枢神经系统的发育，在稳定脑膜表面的细胞外基质、组织放射状胶质支架和层化小脑皮层方面发挥着重要作用。胚胎发育期间，选择性药物破坏脑膜细胞将导致小脑皮层和齿状回的特定畸形。从覆盖大脑皮层上的脑膜中衍生出的脑膜细胞移植到成年大鼠脊髓损伤部位可以促进轴突再生。此外，体外研究显示，脑膜细胞能够趋化引导未成熟神经元的迁移，但不能引导胶质细胞的迁移。HMC的fibronectin特异性抗体免疫荧光染色呈阳性，而GFAP和α-smooth muscle actin（α-SMA）呈阴性。
培养方式
培养瓶：PLL（多聚-L-赖氨酸）包被培养瓶。
培养基：HMC用提供的MenCM完全培养基（包含基础培养基、2% FBS、1% MCGS和1% P/S）培养。
操作步骤：
1) 包被PLL（2 μg/cm2）培养瓶（T-75培养瓶）的准备：将10 mL无菌水加入到T-75培养瓶中，加入15 μL PLL原液，轻轻吹匀后将培养瓶放置在37°C的孵育箱中过夜（或至少1小时）。
2) 无菌水清洗包被多聚L -赖氨酸的T-75 2次，加入20 mL完全培养基，将解冻后的HMC加入至包被的T-75中，十字交叉法轻柔摇晃培养瓶使细胞分布均匀，将培养瓶放入细胞培养箱中。（注：不建议在解冻后稀释和离心细胞，因为这些操作对细胞的伤害比培养中残留的二甲基亚砜（DMSO）的影响更大。同时，将细胞放置在PLL涂层的培养瓶中有助于促进细胞附着。）
换液：为了获得最佳结果，在培养开始后至少16小时内不要干扰培养。第二天更换培养基，以去除残留的二甲基亚砜和未附着的细胞，之后每隔三天更换一次培养基，直到培养达到约70%的密度，一旦培养达到约70%的密度，每隔一天更换一次培养基，直到培养达到约90%的密度。
传代：当细胞密度达到90%-95%时进行传代。
1) 将T/E、DPBS、培养基提前置于室温平衡（不建议37℃加热）。
2) 弃除旧培养基，并用DPBS清洗细胞后吸除，加入5 mL DPBS和5 mL 0.05% T/E solution 轻柔晃动培养瓶后放入37℃培养箱，一段时间后镜下观察，待细胞完全变圆、脱落，轻轻拍打底部和侧面，加入2 mL FBS（#0500）终止消化，将细胞悬液转移至15 mL离心管中，1000 rpm离心5 min，用新培养基重悬细胞沉淀后计数，根据5000 cells/cm2的密度传代至预先用PLL包被的培养瓶中。
生长条件：在CO2浓度为5%，温度为37℃，相对湿度（RH）为95%的细胞培养箱中培养。
表1 HMC培养材料
参考文献
[1] Hartmann D, Sievers J, Pehlemann FW, Berry M. (1992) “Destruction of meningeal cells over the medial cerebral hemisphere of newborn hamster prevents the formation of the infrapyramidal blade of the dentate gyrus.” J Comparative Neurol. 320: 33-61.
[2] Franzen R, Martin D, Daloze A, Moonen G, Schoenen J. (1999) “Grafts of meningeal fibroblasts in adult rat spinal cord lesion promote axonal regrowth.” Neuroreport. 10: 1551-6.
[3] Hartmann D, Schulze M, Sievers J. (1998) “Meningeal cells stimulate and direct the migration of cerebellar external granule cells in vitro.” J Neurocytol. 27: 395-409.
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