【ATCC】人脐静脉内皮细胞（ HUVEC）培养基的配制

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人原代细胞 Human Primary cells 人脐带细胞系统 Human Umbilical Cord Cell System ATCC 人脐静脉内皮细胞 Umbilical Vein Endothelial Cells Vascular Cell Basal Medium

小白求助前辈指路

人脐静脉内皮细胞培养不成功、实验做不出来怎么办？新手小白迫切求助，希望各位前辈在文章下方留言，分享自己的经验，为小白们答疑解惑！

人脐静脉内皮细胞

（HUVEC）

血管内皮细胞对于维持血管内环境平衡起着重要作用。血管内皮细胞产生和分泌凝血和纤溶系统的激活剂和抑制剂，释放调节细胞增殖和控制血管壁张力的分子，并介导血小板的粘附和聚集。由于易于获取和纯度高，人脐静脉内皮细胞（HUVECs）是研究内皮细胞生理学、血管生成和药物发现的最受欢迎的内皮细胞。HUVECs具有“鹅卵石”形态，细胞生长为单层紧密相对的多边形大细胞，含有原位内皮细胞特征的细胞质包涵体（Weibel-Palade小体）以及大量的平滑肌肌动蛋白，vWF/Factor VIII和CD-31特异性抗体免疫荧光染色呈阳性，并具有摄取乙酰化低密度脂蛋白的能力。培养的HUVECs也含有与组织供者血型相适应的ABH抗原，但在培养的平滑肌细胞或成纤维细胞上未检测到这些抗原。

完全培养基的配制

1)从冰箱中取出生长试剂盒（暂时储存温度为-20℃，长期保存温度为-80℃），确保所有组分的盖子都是紧闭的。

2)在将生长试剂盒的组分加入基础培养基之前，将其解冻。需要将L-谷氨酰胺组分在37°C的水浴中加热，并摇动以充分混匀，随后再加入至基础培养基中。

3)取出一瓶Vascular Cell Basal Medium （475 mL，2-8℃储存）。

4)使用70%乙醇喷雾剂对生长试剂盒组分瓶和基础培养基瓶的外部表面进行消毒。

5)层流罩或生物安全柜中无菌操作，使用单独的无菌移液管将每个生长试剂盒组分（转移到基础培养基瓶中，并充分混匀。（2-8℃避光保存，可稳定储存30天）。

6)抗菌剂的添加：

大多数细胞培养技术人员在常规培养工作中会避免使用抗生素和抗真菌药物。抗生素和抗真菌药物可能会掩盖敏感细菌和真菌以及支原体的污染，同时使支原体的繁殖无法被察觉，并且抗生素和抗真菌药物可能会干扰培养中敏感细胞的代谢。在初级培养物可以选择短期使用抗生素和抗真菌药物，或者在繁殖特定有价值的细胞时作为保护措施使用。如果需要按推荐的终浓度的量进行添加。

操作步骤

① 从存储处取出小瓶并解冻。充分混合或短暂涡旋，确保溶液均匀。

②在层流罩或生物安全柜中，将适量的抗生素/抗真菌溶液转移到完整培养基中。

③在补充完整生长培养基时，将其稀释为1:1000；即每500 mL完整细胞特异性培养基中加入0.5 mL青霉素-链霉素-两性霉素B溶液（Penicillin-Streptomycin-Amphotericin B Solution）。

④在细胞分离过程中使用时，将其稀释为1:100；即每50 mL完整细胞特异性培养基中加入0.5 mL青霉素-链霉素-两性霉素B溶液（最终浓度：青霉素：10 Units/mL，链霉素：10 µg/mL，两性霉素B：25 ng/mL）。

紧闭补充完后的培养基瓶子，轻轻摇晃以确保溶液均匀。避免剧烈摇动以防止起泡。做好标记。完全补充的培养基在2°C至8°C的避光储存（不要冷冻），在此条件下完全培养基可稳定储存30天。

7)酚红的添加：

酚红可以作为细胞培养基的pH指示剂使用。在准备完全培养基时，作为ATCC初级细胞溶液系统的一部分，可以选择添加酚红作为培养基的组分。

操作步骤

①在层流罩或生物安全柜中，将适量的酚红转移到完整培养基中。

②在补充完整生长培养基时，按1:1000的比例稀释；即每500 mL完全细胞特异性培养基中加入0.5 mL酚红（最终浓度：33 µM）。紧闭补充生长培养基的瓶子，轻轻摇晃以确保溶液均匀。避免剧烈摇动以防止起泡。做好标记。

③添加后的完全培养基应在2°C至8°C避光存放（不要冷冻）。在这此条件下，完全培养基可稳定储存30天。