【ScienCell】人肝星形细胞（ HHSteC）产品使用攻略
人肝星形细胞培养不成功、实验做不出来怎么办？新手小白迫切求助，希望各位前辈在文章下方留言，分享自己的经验，为小白们答疑解惑！
人肝星形细胞
（HHSteC）
肝星状细胞（HSteC）是肝叶内结缔组织细胞，呈现出肌成纤维细胞样或脂肪细胞样表型。它们参与调节肝脏细胞外基质的稳态、修复、再生、纤维化以及控制视黄醇的代谢、存储和释放。在肝损伤后，HSteC由静息状态转变为激活状态，转变成肌成纤维细胞样细胞，同时存储的视黄醇的脂滴随着转化的过程减少，是纤维化肝脏中I型胶原的主要来源。其次，HSteC还被认为通过细胞收缩调节肝脏微循环，并在疾病状态下参与肝内门脉高压的发病机制。HSteC的增殖和迁移以及趋化因子的表达参与了肝炎和纤维化的发病机制。对HSteC活化的分子调控的新认识将有助于肝纤维化治疗方法的探索，并可能减少慢性肝损伤患者的发病率和死亡率。
培养方式
培养瓶：PLL（多聚-L-赖氨酸）包被的培养瓶。
培养基：HHSteC用提供的SteCM完全培养基（包含基础培养基、2% FBS、1% SteCGS和1% P/S）培养。
操作步骤：
1) 包被多聚-L-赖氨酸（2 μg/cm2）培养瓶（T-75培养瓶）的准备：将10 mL无菌水加入到T-75培养瓶中，加入15 μLPLL原液，轻轻吹匀后将培养容器放置在37°C的孵育箱中过夜（或至少1小时）。
2) 无菌水清洗包被PLL的T-75 2次，加入20 mL完全培养基，将解冻后的HHSteC加入至包被的T-75中，十字交叉法轻柔摇晃培养瓶使细胞分布均匀，将培养瓶放入细胞培养箱中。（注：不建议在解冻后稀释和离心细胞，因为这些操作对细胞的伤害比培养中残留的二甲基亚砜（DMSO）的影响更大。同时，将细胞置于PLL涂层培养有助于促进细胞附着。）
换液：为了获得最佳结果，在培养开始后至少16小时内不要干扰培养。第二天更换培养基，以去除残留的二甲基亚砜和未附着的细胞，之后每隔三天更换一次培养基，直到培养达到约70%的密度，一旦培养达到约70%的密度，每隔一天更换一次培养基，直到培养达到约90%的密度。
传代：当细胞密度达到90%时进行传代。
1) 将T/E、包被培养瓶、DPBS、培养基提前置于室温平衡（不建议37℃加热）。
2) 弃除旧培养基，并用DPBS清洗细胞后吸除加入5 mL DPBS和5 mL 0.05% T/E solution 轻柔晃动培养瓶后放入37℃培养箱（注：原代细胞传代时请勿使用未稀释的胰蛋白酶），一段时间后镜下观察，待细胞完全变圆、脱落，轻轻拍打底部和侧面，加入1 mL FBS终止消化，将细胞悬液转移至15 mL离心管中，1000 rpm离心5 min，用新培养基重悬细胞沉淀后计数，根据5000 cells/cm2的密度传代至预先用PLL包被的培养瓶中。
生长条件：在CO2浓度为5%，温度为37℃，相对湿度（RH）为95%的细胞培养箱中培养。
表 1 HHSteC 培养材料
参考文献
[1] Reynaert H, Thompson MG, Thomas T, Geerts A. (2002) “Hepatic stellate cells: role in microcirculation and pathophysiology of portal hypertension.” Gut 50:571-581.
[2] Rockey DC. (2001) “Hepatic blood flow regulation by stellate cells in normal and injured liver.” Semin Liver Dis 21(3):337-49.
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