【Serumwerk】非灵长类动物血液分离单核细胞(Hyaline leukocyte)
【Serumwerk】非灵长类动物血液分离单核细胞(Hyaline leukocyte)
非灵长类动物血液分离单核细胞不成功、实验做不出来怎么办?新手小白迫切求助,希望各位前辈在文章下方留言,分享自己的经验,为小白们答疑解惑!
密度梯度法
溶液制备
A. OptiPrep™(使用前轻轻摇动)
B. 10倍浓缩磷酸盐缓冲盐水(10xPBS)。
C. 多糖溶液:6%(w/v)多聚蔗糖400(MWt 400,000)的水。
试验方法
1.将溶液A、B和C按以下体积比:16.7:8.3:75混合,制备密度屏障。
2.在离心管层中,2体积的肝素化血液超过1体积的密度屏障。
3.600 g离心20 min,允许转子不制动而减速。弃去液面上的PBMC。
4.用两体积的缓冲盐水稀释收集到的材料,并将细胞在250-500 g下颗粒化5-10 min。
方法注释
Sittelar等人指定使用肝素化的血液,并使用未稀释的血液。人的血液通常在应用于密度屏障前,用等量的生理盐水稀释。从其他出版物中还不完全清楚采用了哪种战略。使用任何一种能提供最佳结果的方法。
混合器法
溶液制备
OptiPrep™(使用前轻轻摇动)缓冲盐水
试验方法
将10 ml血液与1.25ml OptiPrep™通过几次温和的反转混合,如图2所示进行。
方法注释
Guo等人研究了该方法得出结论,这里描述的混合策略给出了一致的产量,高于任何已建立的替代程序。
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