【Serumwerk】大鼠血液中分离单个核细胞（Mononuclearcell ）——浮选法，碘二醇混合技术
大鼠血液中分离单个核细胞不成功、实验做不出来怎么办？新手小白迫切求助，希望各位前辈在文章下方留言，分享自己的经验，为小白们答疑解惑！
溶液制备
A. OptiPrep™（使用前轻轻摇动）
B. 稀释剂：0.85%（w/v）氯化钠，30 mM Tricine NaOH，pH 7.4（仅适用于工作溶液）
C. Tricine缓冲盐水（TBS）：0.85%氯化钠，10 mM Tricine-NaOH，pH 7.4
D. 37%碘二醇的工作溶液：将3.7体积的OptiPrep™与2.3体积的溶液B混合（可选）。
试验方法
1. 用CO2麻醉动物，通过心脏穿刺收集血液(约10 ml)到含有1 ml 3.8% (w/v)柠檬酸盐作为抗凝剂的10 ml注射器中。
2. 将5 ml大鼠全血与0.625 ~ 0.63 ml OptiPrep™或1.25 ~ 1.26 ml溶液D在合适的加盖离心管中温和但充分混合(通过重复倒置)。
3. 将小体积(0.5 ml)溶液C置于顶部。
4. 在20℃下以1300 g离心30 min。从半月板向下收集PBMCs至距离细胞球约0.5 cm处。
5. 用两体积的缓冲盐水稀释收集的材料，并将细胞颗粒置于250-500 g中5-10分钟。
方法注释
1．如果血液与添加OptiPrep的比例保持不变，则可以处理更多的血液。
2．样品上的少量生理盐水对分离不是必需的，但它有助于从血浆上获取PBMCs。它还可以防止细胞在弯月面处的管壁上聚集和粘附。
3．表1给出了两种不同血容量下的两项实验的PBMCs回收率。
4．与纯化人PBMCs一样，细胞将被血浆中的血小板污染。可通过优先以低RCF (250-300 g持续10分钟)将细胞制成颗粒来实现从人PBMCs中部分去除血小板。该方法已成功用于啮齿类细胞。
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