【Serumwerk】原生生物（Protozoa）分离
原生生物分离不成功、实验做不出来怎么办？新手小白迫切求助，希望各位前辈在文章下方留言，分享自己的经验，为小白们答疑解惑！
食品中分离
溶液制备
A. OptiPrep™（使用前轻摇）
B. 平衡盐缓冲液：150 mM氯化钠，10 mM EDTA，100 mM Tris-HCl，pH 8.0
试验方法
1. 对必要的样品进行预处理，然后在该溶液B中清洗粗细胞两次，然后在同一溶液中重悬。
2. 混合等量的OptiPrep™和溶液B，将4 ml转移到管中低速离心，覆盖4 ml粗悬液。
250 g离心，15℃离心15 min，通过吸出顶层和顶部1.5 ml的密度屏障来收集寄生虫。
不同形态的肌囊藻神经元（Morphologically distinct forms of Sarcocystis neurona）分离
溶液制备
A. OptiPrep™（使用前轻轻摇动）
B. 任何等渗溶液：RPMI，DMEM，Hank’s 平衡盐溶液，磷酸盐缓冲盐水等。
C. 溶液B中的A23187（1μM）。
试验方法
1. 在溶液B中洗涤感染细胞单层三次后，在溶液C中，在5% CO2/95%空气中37℃孵育40 min。
2. 用溶液B稀释Optiprep™，制备1.03,1.04和1.06 g/ml的密度梯度溶液(相当于5.4%，6.4%和10.3%，w/v碘克沙醇)。
3. 将4 ml 10.3%碘克沙醇溶液转移到15 ml离心管中，并覆盖相同体积的其他两种梯度溶液。
4. 将含裂殖子的溶液以300-500 g离心10 min，并将颗粒在溶液B中轻轻重悬。
5. 将1 ml悬浮液置于梯度上方并在1000 g下在20℃下离心25 min。
6. 根据需要从梯度和过程中收获带状材料和任何颗粒。将回收的材料制成颗粒，用两体积的溶液B稀释样品，以300-500g离心10分钟。
注释
1. 任何适当的策略应该使用裂殖子的有效版本。
2. 不同的密度梯度分离的解决方案可能需要调制寄生虫从其他来源。这只能根据经验决定的。
3. 如果宿主细胞碎片持续污染裂殖子那么它可能有利于层悬浮在一个密集的解决方案(例如1.08 g / ml)梯度下，浮选允许裂殖子带。
4. 形态和细胞核,细胞质的比例三个带状的形式的裂殖子梯度独特不同的。在A界面带的寄生虫呈泪状到长圆形,而在接口B更圆核较低:细胞质比率。裂殖子早期带状在C接口以及宿主细胞。
其他病原体
在早期Percoll屏障和连续蔗糖梯度的基础上添加最终的连续10-50% (w/v)碘克沙醇梯度，以改善原生动物bieneusi(一种在灵长类动物粪便中发现的寄生虫，引起主要胃肠道症状，尤其是艾滋病患者)的孢子的纯化。此外，这一额外的纯化步骤不会导致恢复的任何损失(与早期密度梯度步骤相关的问题)。梯度是10- 50% (w/v)碘克沙醇(OptiPrep™用0.25 M蔗糖/1 mM EDTA/10 mM Tris-HCl, pH 7.4稀释)在30000 g离心60分钟。来自前一个梯度的最稠密的孢子在碘克沙醇梯度中进一步分解为两个不同的种群，中位密度为1.15和1.16 g/ml。与上文所述的肌孢子菌神经细胞分离一样，碘克沙醇梯度显示出其他密度梯度培养基所缺乏的分解不同类型细胞的能力。OptiPrep™生产的梯度也被用于纯化Mattesia orzaephili卵囊。
从细菌、有机物和工程纳米材料中分离原生动物
在农业和消费品加工中使用碳纳米管的新技术需要有效的方法将这些合成颗粒从原生动物、细菌和残留粪便物质等生物颗粒中分离出来。Mortimer等开发了碘克沙醇梯度，可以实现这些类型的分离。在初始离心(5 min，600 g)后，大部分细菌和游离纳米管(上清液)仍保留在上清液中。为了从成球材料中去除剩余的无纳米管，将后者重悬浮;超过10% (w/v)碘克沙醇分层并在约离心。1800 g 5分钟。在20%碘克沙醇的条件下，将颗粒材料再次离心(相同的重力和时间)，从颗粒细菌和粪便物质中分离出原生动物(界面)。环境中大量有机和无机化合物的命运是一个重大的全球问题:利用碘克沙醇梯度研究了嗜热四膜虫对石墨烯的摄取，而碘克沙醇梯度已成功用于检测土壤样本中的弓形虫卵囊。
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