【Serumwerk】胃黏膜的壁细胞和主细胞（Parietal and chief cells from the gastric mucosa）分离

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Serumwerk Bernburg AG 1893 OptiPrep™

所需溶液制备

细胞悬浮液

细胞悬浮培养基通常是常规的平衡盐溶液，例如132.4 mM NaCl, 5.4 mM KCl, 5 mM Na₂HPO₄, 1 mM NaH₂PO₄, 1.2 mM MgSO₄和1 mM CaCl₂，通常在使用前立即添加各种添加物：2 mg/ml BSA, 10 mM葡萄糖，0.5或1.0 mM DTT, 1 mM丙酮酸盐(每100 ml 11 g)，10 mM HEPES, 0.01 mg/ml酚红，用NaOH缓冲到pH 7.4。除丙酮酸盐和牛血清白蛋白外，这些试剂的浓缩库存可在冰箱中保存数周。

碘二醇溶液

A. OptiPrep™（使用前轻轻摇动）

B. 添加剂溶液：40 mg/ml牛血清白蛋白（BSA），2.0 mM DTT，9.6 mM氯化钾，4.8 mM硫酸镁，60 mM Tris HEPES，pH 7.4。

C. OptiPrep™稀释液：将10mL 10体积Hank’s缓冲盐溶液（含Ca²⁺和Mg²⁺）与50毫升溶液B混合；必要时，用100 mM Tris调整至pH 7.4，用水配制至100毫升。

D. OptiPrep™工作溶液（WS）为24.4%（w/v）碘二醇（ρ = 1.134 g/ml）：将9体积OptiPrep™与11体积溶液C和2体积水混合。

E. WS稀释剂：10 mg/ml BSA，132 mM氯化钠，5.4 mM氯化钾，1.2 mM硫酸镁，0.5 mM DTT，15 mM Tris-HEPES，pH 7.4。

试验方案

细胞悬浮液处理

将来自酶的细胞制成颗粒，在200 g下消化8 min并抽吸上清液。将细胞颗粒以0.1-0.15 ml / ml的浓缩细胞重悬于细胞悬浮培养基或最低密度梯度溶液中。在12-15 ml的管中，在梯度的顶部放置2 ml细胞。在50ml的管使用比例较大的体积。降低细胞浓度将使可能发生的任何细胞凝集最小化。

离心法

1．将四层梯度以600-1000 g离心8 min，或两层梯度以200 g离心10 min，使用缓慢加速程序，并允许转子减速没有制动。

2．采集在连续梯度的顶部或在不连续梯度的密度最小层以下的界面处形成的壁叶细胞。