【Wako】WB实验膜种类区分方法
即使为同一目的所用的试剂种类繁多,同一物质也会有不同的浓度、纯度、规格。
因此,经常有研究人员向我们问到“不知道哪一种适合自己的实验”等。
为了解决这样的问题,我们将介绍一些正确区分使用FUJIFILM Wako品牌试剂的方法。
WB用膜
硝酸纤维素膜
硝酸纤维素膜是由纤维素羟基经硝酸酯化而形成的,主要通过疏水相互作用进行蛋白的非特异性吸附。因其易于处理并且可以长期储存的特点,一直被作为印迹膜使用。它具有亲水性,因此无需用甲醇进行预处理。但强度较弱,蛋白的结合能力为~100 μg/cm2,比其他膜小,转录时间过长可能会使已转录的蛋白再次游离。
尼龙膜
尼龙膜使用了经尼龙或胺化学改性的尼龙。比硝酸纤维素膜具有更好的蛋白结合能力,尤其是经化学改性的尼龙膜带有正电荷,与带负电荷的蛋白发生强烈的静电相互作用。但由于容易发生蛋白以外的非特异性吸附,必须进行充分的封闭处理。
PVDF膜
PVDF膜是以聚偏二氟乙烯(PVDF) 为支撑的膜,可通过疏水相互作用吸附蛋白。虽然预处理时需要使用甲醇,但其具有较大的蛋白结合能力、优异的强度和化学相容性,因此经常被用作印迹膜。
膜种类及性质
【要点】膜孔径
用于Western blotting的膜孔径有0.45 μm和0.2 μm。通常使用的是0.45 μm,但转录15 kDa或更小分子量的蛋白质时,0.2 μm具有更高的结合效率并且可以抑制吸附后的游离。
参考文献
1)口野嘉幸,平井久丸,櫻林郁之介 編:「遺伝子・タンパク質 実験操作 ブロッティング法」(ソフトサイエンス社)(1987).
2)大藤道衛 編:「電気泳動なるほどQ&A」(羊土社)(2005).
3)森山達哉 編:「バイオ実験で失敗しない!検出と定量のコツ」(羊土社)(2005).
※ 仅供实验研究用,不可用于临床诊断。
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