【Wako】琼脂糖使用方法
即使为同一目的所用的试剂种类繁多,同一物质也会有不同的浓度、纯度、规格。
因此,经常有研究人员向我们问到“不知道哪一种适合自己的实验”等。
为了解决这样的问题,我们将介绍一些正确区分使用FUJIFILM Wako品牌试剂的方法。
琼脂糖
应用于核酸电泳的琼脂糖是从石花菜、江蓠等红藻中所提取的高纯度琼脂。
琼脂糖虽在分子生物学实验中较为常见,但其实种类繁多。为选择适合实验目的的琼脂糖,需检查以下项目。
凝胶强度
琼脂糖凝胶破裂所需的载荷用(g/cm2)来表示。标准琼脂糖约为≧1,200 g/cm2(浓度1.5%,Nippon Gene Agarose S)。分离高分子核酸时,需要使用低浓度琼脂糖,因此使用高凝胶强度的琼脂糖可更有效地制备凝胶。反之,在分离低分子核酸时,则使用凝胶强度低的琼脂糖。
熔点
琼脂糖凝胶融化的温度。标准琼脂糖的熔点在90°C左右,可通过引入羟乙基来降低熔点。这种低熔点型琼脂糖比双链DNA的变性温度要低,加热至65°C左右即会熔化,因此应用于DNA回收等。低熔点琼脂糖的胶凝化温度也比其他琼脂糖低。
硫酸含量
应用于电泳的琼脂糖由琼脂糖和琼脂胶组成,杂质琼脂胶中含有硫酸基团。因此,琼脂糖标准品中的硫酸含量表示琼脂糖的纯化程度,高纯度琼脂糖的硫酸含量表示为≤0.1-0.2%。
电渗度
琼脂糖因带有硫酸基等而带负电,接触的缓冲液带正电,两者极性相反。在这种状态下进行电泳时,带正电的缓冲溶液向阴极移动。这种现象称为电渗,也是琼脂糖凝胶电泳中迁移缓慢的原因。因此,一般使用电渗度低的琼脂糖进行电泳。
Nippon Gene Agarose 产品系列及正确使用方法
参考文献
1)電気泳動学会 編:「新版 電気泳動実験法」(文光堂)(1989).
2)大藤道衛 編:「電気泳動なるほどQ&A」(羊土社)(2007).
3)Green, R. M. and Sambrook, J.:”Molecular Cloning A Laboratory Manual, 4th ed.”, Cold Spring Harbor Laboratory Press(2012).
※ 仅供实验研究用,不可用于临床诊断。
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