【PromoCell】人M2巨噬细胞（Human M2 Macrophages）产品使用攻略
人M2巨噬细胞培养不成功、实验做不出来怎么办？新手小白迫切求助，希望各位前辈在文章下方留言，分享自己的经验，为小白们答疑解惑！
人M2巨噬细胞
（Human M2 Macrophages）
M2-(M-CSF)由单核细胞诱导分化而来，CD68+和CD163+均为阳性
培养方式
培养瓶：纤连蛋白（Bovine Plasma Fibronectin）包被培养瓶。
培养基：hM-CSF用提供的M2-Macrophage Generation Medium XF（完全培养基（包含Basal Medium M2、Supplement Mix M2和Cytokine M-CSF）培养。
操作步骤
1) 包被纤连蛋白培养瓶的准备（T-25培养瓶）：按每平方厘米的培养表面积加入100µl无菌Dulbecco's磷酸盐缓冲盐（DPBS）稀释的纤连蛋白溶液（10µg/ml），将培养瓶放置在37°C的孵育箱中过夜（或至少2小时）。在铺细胞前将未凝固纤连蛋白溶液吸出（可重复使用2次）。
2) 完全培养基的配制：将Supplement Mix M2和Cytokine Mix—M-CSF加入到基本培养基中。（添加细胞因子后的完全培养基使用期限不可超过一周）
3) T-25中加入8 mL的M2-Macrophage Generation Medium XF完全培养基，在细胞播种前，在37°C和5%二氧化碳培养箱中预平衡至少30 min。
4) M-CSF的复苏。将14 ml新鲜M2-Macrophage Generation Medium XF（2-8°C）吸入15 ml的无菌离心管中，无需预热。将解冻后的细胞迅速转移到离心管中，在移液过程中，避免引入气泡。温和的倒置混合，让细胞在细胞操作台中室温恢复20 min。恢复期结束后，对细胞进行计数。将细胞在室温下350 × g离心15 min。吸除上清液，以106 cells/ml的细胞密度，用新鲜M2-Macrophage Generation Medium XF完全培养基对细胞沉淀轻柔重悬。
5) 铺板：将细胞悬液以2×105 cells/ cm2的细胞量至于含有M2-Macrophage Generation Medium XF预平衡的培养瓶中，置于培养箱中培养（4-24 h）。
换液：培养开始后4小时内不要干扰培养。在4-24 h内更换新鲜培养基，去除非贴壁细胞。每2-3天更换一次培养基，巨噬细胞可以在培养中维持数周。
生长条件
在CO2浓度为5%，温度为37℃，相对湿度（RH）为95%的细胞培养箱中培养。
表 1 Human M2 Macrophages培养材料
参考文献
[1] Murray, P.J. and T.A. Wynn, Protective and pathogenic functions of macrophage subsets. Nat Rev Immunol, 2011. 11(11): p. 723-37.
[2] Wynn, T.A., A. Chawla, and J.W. Pollard, Macrophage biology in development, homeostasis and disease. Nature, 2013. 496(7446): p. 445-55.
[3] Murray, P.J. and T.A. Wynn, Obstacles and opportunities for understanding macrophage polarization. J Leukoc Biol, 2011. 89(4): p. 557-63.
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