【ScienCell】人子宫肌层微血管内皮细胞（HMMEC）产品使用攻略

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小白求助前辈指路

人子宫肌层微血管内皮细胞培养不成功、实验做不出来怎么办？新手小白迫切求助，希望各位前辈在文章下方留言，分享自己的经验，为小白们答疑解惑！

人子宫肌层微血管内皮细胞

（HMMEC）

子宫肌层微血管内皮细胞（MMEC）位于子宫内膜与子宫浆膜之间的子宫肌层，呈现出典型的鹅卵石状形态。在妊娠期间，通过MMEC增殖发生血管生成，以支持子宫平滑肌细胞层的肥大。研究表明，子宫肌层内皮细胞功能障碍可能导致子痫前期的发展。此外，MMEC的增殖和血管生成可在平滑肌瘤的形成中发挥作用。MMEC表达催产素受体，可促进子宫肌层微血管的舒张。HMMEC的培养可应用于研究血管生成机制和开发女性生殖道疾病治疗方法。

HMMEC分离自人子宫颈部，其vWF/Factor VIII和CD31 (PECAM1)特异性抗体免疫荧光染色呈阳性。

培养方式

培养瓶：纤连蛋白（Bovine Plasma Fibronectin, 2 µg/cm²）包被培养瓶。

培养基：HMMEC用提供的ECM完全培养基（包含基础培养基、1% ECGS、1% P/S）培养。

操作步骤

1) 包被纤连蛋白（2 µg/cm²）培养瓶的准备（T-75培养瓶）：将10 mL无菌的Dulbecco's磷酸盐缓冲盐（DPBS）与150 µL纤连蛋白原液混匀后加入到T-75培养瓶中，将培养瓶放置在37°C的孵育箱中过夜（或至少2小时）。在铺细胞前将未凝固纤连蛋白溶液吸出（可重复使用2次），加入20 mL ECM完全培养基（基础培养基、ECGS和P/S按比例混合配制）。

2) 吸出未凝固的纤连蛋白溶液，T-75中加入20 mL的完全培养基，将解冻后的细胞小心加入到培养基中，十字交叉法轻柔平晃培养瓶。（注：不建议在解冻后对细胞进行稀释和离心，因为这些与培养物中残留DMSO的作用相比，这些作用对细胞的损伤更大；将HMMEC置于纤连蛋白包被的培养瓶中以促进生长。）

换液：培养开始后16小时内不要干扰培养。次日更换培养液，去除残留的DMSO和未贴壁细胞。之后每三天更换一次培养基，直到培养达到大约70%的密度。一旦培养达到大约70%的密度，每隔一天更换一次培养基，直到培养达到大约90%的密度。

传代：当细胞密度达到90%时进行传代。

1) 将T/E、包被培养瓶、DPBS、培养基提前置于室温平衡（不建议37℃加热）。

2) 弃除旧培养基，并用DPBS清洗细胞后吸除加入8 mL DPBS和2 mL 0.05% T/E solution 轻柔晃动培养瓶后放入37℃培养箱（注：原代细胞传代时请勿使用未稀释的胰蛋白酶），一段时间后镜下观察，待细胞完全变圆、脱落，轻轻拍打底部和侧面，加入2 mL FBS，将细胞悬液转移至15 mL离心管中，1000 rpm离心5 min，用新培养基重悬细胞沉淀后计数，根据5000-7000 cells/cm²的密度传代至预先用纤连蛋白包被的培养瓶中。

生长条件

在CO₂浓度为5%，温度为37℃，相对湿度（RH）为95%的细胞培养箱中培养。

表 1 HMMEC培养材料

参考文献

[1] Gargett C, Bucak K, Rogers P. (2000) “Isolation, characterization and long-term culture of human myometrial microvascular endothelial cells.” Hum Reprod. 15(2): 293-301.

[2] Hayman R, Brockelsby J, Kenny L, Baker P. (1999) “Preeclampsia: the endothelium, circulating factor(s) and vascular endothelial growth factor.” J So Gynecol Investig. 6(1): 3-10.

[3] Weston G, Cann L, Rogers P. (2003) “Myometrial microvascular endothelial cells express oxytocin receptor.” BJOG. 110(2):149-156.

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