【Lonza】人肠道肌成纤维细胞(InMyoFib)产品使用攻略
人肠道肌成纤维细胞培养不成功、实验做不出来怎么办?新手小白迫切求助,希望各位前辈在文章下方留言,分享自己的经验,为小白们答疑解惑!
人肠道肌成纤维细胞
(InMyoFib)
肠道上皮下肌成纤维细胞位于上皮细胞下的固有层。它们在肠道的生长和发育、免疫学、炎症、纤维化、水和电解质转运、收缩和伤口愈合中起着基础性的作用,alpha smooth muscle actin(α-SMA)特异性抗体的免疫荧光染色呈阳性。
培养方式
培养基:用提供的完全培养基(包含Basal Medium和其他补充剂)培养。
操作步骤
1) 完全培养基的配制:将室温融化的补充剂用移液器上下轻柔混匀,并全部加入到Basal Medium中并混合均匀,4℃避光保存。
2) T-25中加入5 mL完全培养基。在细胞播种前,在细胞培养箱中预平衡至少30 min。将解冻后的细胞转移到预热的完全培养基中(按2500 cells/cm2的密度),并置于细胞培养箱中培养。
换液:在培养开始后至少16小时内不要干扰培养。第二天更换培养基,以去除残留的二甲基亚砜和未附着的细胞,之后每隔三天更换一次培养基。
传代:当细胞密度60%~80%时进行传代。
1) 将T/E、HEPES、TNS和培养基提前置于室温平衡(不建议37℃加热)。
2) 弃除旧培养基,并用5 ml HEPES清洗细胞后吸除,加入2 mL Trypsin/EDTA溶液。室温下分离细胞(2-6 min),用显微镜检查细胞。当超过90%的细胞开始脱落时,轻轻敲击容器的侧面以松动剩余的细胞,加入4 mL TNS并轻轻摇动,小心地吸取细胞悬浮液并快速转移到15 mL离心管中。用2 ml HEPES收集残余的细胞并转移至离心管中。以220×g的速度离心细胞5 min。弃掉上清液,加入2-3 mL完全培养基,并通过小心地上下吸移来重悬细胞并对活细胞计数。按2500 cells/cm2接种密度将细胞分装到预先预热至37°C的含完全培养基的培养瓶(1 ml/5 cm2的量添加培养基),或根据实验设计安排种植密度,并放入培养箱中培养,每两到三天更换培养基。(传代至单层细胞需4-8天)
生长条件
在CO2浓度为5%,温度为37℃,相对湿度(RH)为95%的细胞培养箱中培养。
表 1 InMyoFib培养材料
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