【ScienCell】人结肠上皮细胞（HCoEpiC）产品使用攻略
人结肠上皮细胞培养不成功、实验做不出来怎么办？新手小白迫切求助，希望各位前辈在文章下方留言，分享自己的经验，为小白们答疑解惑！
人结肠上皮细胞
（HCoEpiC）
结肠是覆盖结肠黏膜表面的细胞，将宿主的内部与外部环境分隔，形成重要的机械屏障。除了上皮细胞在离子传输中的明确作用外，这些细胞还作为黏膜免疫系统的一个组成部分发挥功能。HCoEpiC可以在体外处理和呈递抗原给T细胞，并可在体内刺激表达HLA-II类和细胞间粘附分子，并对广泛的细胞因子做出反应，表现出改变的基因表达和生长特性。正常结肠上皮细胞还表达α3、α5、α6、β1和β4整合素。
HCoEpiC分离自结肠组织，可通过cytokeratin-18和cytokeratin-19特异性抗体免疫荧光染色进行鉴定。
培养方式
培养瓶：PLL（多聚-L-赖氨酸）包被的培养瓶。
培养基：HCoSMC在提供的CoEpiCM完全培养基（包含基础培养基、1% CoEpiCGS和1% P/S）中培养。
操作步骤
1) 包被PLL（2 μg/cm2）培养瓶（T-75培养瓶）的准备：将10 mL无菌水加入到T-75培养瓶中，加入15 μL PLL原液，轻轻吹匀后将培养瓶放置在37°C的孵育箱中过夜（或至少1小时）。
2) 无菌水清洗包被PLL的T-75 2次，加入20 mL CoEpiCM完全培养基（基础培养基、CoEpiCGS和P/S按比例混合配制），将解冻后的HCoSMC加入至包被的T-75中，十字交叉法轻柔摇晃培养瓶使细胞分布均匀，将培养瓶放入细胞培养箱中。（注：不建议在解冻后稀释和离心细胞，因为这些操作对细胞的伤害比培养中残留的二甲基亚砜（DMSO）的影响更大。同时，细胞在PLL包被培养瓶中有助于促进细胞附着。）
换液：为了获得最佳结果，在培养开始后至少16小时内不要干扰培养。第二天更换培养基，以去除残留的二甲基亚砜和未附着的细胞，之后每隔三天更换一次培养基，直到培养达到约70%的密度，一旦培养达到约70%的密度，每隔一天更换一次培养基，直到培养达到约90%的密度。
传代：当细胞密度达到90%-95%时进行传代。
1) 将T/E、DPBS、培养基提前置于室温平衡（不建议37℃加热）。
2) 弃除旧培养基，并用DPBS清洗细胞后吸除加入10 mL 0.05% T/E solution 轻柔晃动培养瓶后放入37℃培养箱（注：原代细胞传代时请勿使用未稀释的胰蛋白酶），一段时间后镜下观察，待细胞完全变圆、脱落，轻轻拍打底部和侧面，加入5 mL FBS（#0500）终止消化，将细胞悬液转移至15 mL离心管中，1000 rpm离心5 min，用新培养基重悬细胞沉淀后计数，根据5000-7000 cells/cm2的密度传代至预先用PLL包被的培养瓶中。
生长条件
在CO2浓度为5%，温度为37℃，相对湿度（RH）为95%的细胞培养箱中培养。
表 1 HCoEpiC培养材料
参考文献
[1] Mayer L, Eisenhardt D, Salomon P, Bauer W, Plous R, Piccinini L. (1991) “Expression of class II molecules on intestinal epithelial cells in humans. Differences between normal and inflammatory bowel disease.” Gastroenterology. 100: 3-12.
[2] Eckmann L, Jung HC, Schuerer-Maly CC, Panja A, Morzycka-Wroblewska E, Kagnoff MF. (1993) “Differentialcytokine expression by human intestinal epithelial cell lines: regulated expression of interleukin-8.” Gastroenterology. 105: 1689-1697.
[3] Stallmach, A., v Lampe, B., Matthes, H., Bornhoft, B., and Riecken, E. O. (1992) Diminished expression of integrin adhesion molecules on human colonic epithelial cells during the benign to malign tumor. Gut 33:342-346.
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