【ScienCell】人食管上皮细胞（HEsEpiC）产品使用攻略

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人原代细胞 Human Primary cells 胃肠道细胞系统 Gastrointestinal Cell System Sciencell 人食管上皮细胞 Esophageal Epithelial Cells Epithelial Cell Medium

小白求助前辈指路

人食管上皮细胞培养不成功、实验做不出来怎么办？新手小白迫切求助，希望各位前辈在文章下方留言，分享自己的经验，为小白们答疑解惑！

人食管上皮细胞

（HEsEpiC）

人类食管由非角化的分层鳞状上皮覆盖，其顶层细胞膜和细胞间连接复合物形成了对腔内内容物的屏障。该屏障有助于减少表面细胞对渗透压变化的暴露，而渗透压的变化经常发生在食管腔内。组织学上，食管上皮由两个区组成，基底区和分化区，细胞增殖仅限于基底区，细胞被认为是从该区域向食管腔内迁移。迁移与分化的起始和分化标志物的表达顺序有关。HEsEpiC是研究食管上皮生理和食管癌发生机制的体外模型。HEsEpiC的cytokeratin-18和cytokeratin-19特阴性抗体免疫荧光染色呈阳性。

HEsEpiC是非常敏感的细胞，在培养过程中不进行多次增殖。解冻细胞前应组织好实验，细胞应尽快用于实验。

培养方式

培养瓶：PLL（多聚-L-赖氨酸）包被的培养瓶。

培养基：HEsEpiC在提供的EpiCM-2完全培养基（包含基础培养基、1% EpiCGS-2和1% P/S）中培养。

操作步骤

1) 包被PLL（2 μg/cm²）培养瓶（T-75培养瓶）的准备：将10 mL无菌水加入到T-75培养瓶中，加入15 μL PLL原液，轻轻吹匀后将培养瓶放置在37°C的孵育箱中过夜（或至少1小时）。

2) 无菌水清洗包被PLL的T-75 2次，加入20 mL EpiCM-2完全培养基（基础培养基、EpiCGS-2和P/S按比例混合配制），将解冻后的HEsEpiC加入至包被的T-75中（推荐种植密度为10000 cells/cm²），十字交叉法轻柔摇晃培养瓶使细胞分布均匀，将培养瓶放入细胞培养箱中。（注：不建议在解冻后稀释和离心细胞，因为这些操作对细胞的伤害比培养中残留的二甲基亚砜（DMSO）的影响更大。同时，细胞在PLL包被培养瓶中有助于促进细胞附着。）

换液：为了获得最佳结果，在培养开始后至少16小时内不要干扰培养。第二天更换培养基，以去除残留的二甲基亚砜和未附着的细胞，之后每隔三天更换一次培养基，直到培养达到约70%的密度，一旦培养达到约70%的密度，每隔一天更换一次培养基，直到培养达到约90%的密度，细胞尽快用于实验。

表 1 HEsEpiC培养材料

参考文献

[1] Orlando RC. (2000) “Gastroesophageal Reflux Disease: Offensive Factors and Tissue Resistance.” New York: Dekker.

[2] Orlando GS, Tobey NA, Wang P, Abdulnour-Nakhoul S, Orlando RC. (2002) “Regulatory volume decrease in human esophageal epithelial cells.” Am J Physiol Gastrointest Liver Physiol 283: G932-G937.

[3] Jankowski J, Hopwood D, Dover R, Wormsley KG. (1993) “Development and growth of normal, metaplastic and dysplastic oesophageal mucosa: biological markers of neoplasia.” Eur. J. Gastroenterol. Hepatol. 5:235-246.

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