【ScienCell】人直肠成纤维细胞（HrecF）产品使用攻略

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人原代细胞 Human Primary cells 胃肠道细胞系统 Gastrointestinal Cell System Sciencell 人直肠成纤维细胞 Rectal Fibroblasts Fibroblast Medium 2301

小白求助前辈指路

人直肠成纤维细胞培养不成功、实验做不出来怎么办？新手小白迫切求助，希望各位前辈在文章下方留言，分享自己的经验，为小白们答疑解惑！

人直肠成纤维细胞

（HrecF）

人直肠位于下消化道，是粪便的临时储存地。直肠成纤维细胞是直肠的重要结构组成部分，与溃疡性结肠炎、克罗恩病和直肠癌等多种疾病有关。成纤维细胞是源自胚胎中间层的间充质细胞，主要功能是维持结缔组织的结构完整性，并在组织修复和重塑中发挥作用。研究表明，人直肠成纤维细胞（HRecF）的功能变化可能会影响溃疡性结肠炎患者的伤口愈合，并影响上皮细胞增殖。在克罗恩病中，HrecF在肠道炎症中异常增殖，导致纤维性瘢痕形成。原代HRecF可用于研究直肠癌、溃疡性结肠炎和克罗恩病的病理生理学，并帮助开发这些疾病的治疗方法。

HrecF分离自人直肠组织，其fibronectinte特异性抗体免疫荧光染色呈阳性。

培养方式

培养瓶：PLL（多聚-L-赖氨酸）包被培养瓶。

培养基：HrecF用提供的FM完全培养基（包含基础培养基、2% FBS、1% FGS和1% P/S）培养。

操作方法

1) 包被PLL（2 μg/cm²）培养瓶（T-75培养瓶）的准备：将10 mL无菌水加入到T-75培养瓶中，加入15 μL PLL原液，轻轻吹匀后将培养瓶放置在37°C的孵育箱中过夜（或至少1小时）。

2) 无菌水清洗包被PLL的T-75 2次，加入20 mL FM完全培养基（基础培养基、FBS、FGS和P/S按比例混合配制），将解冻后的HrecF加入至包被的T-75中，十字交叉法轻柔摇晃培养瓶使细胞分布均匀，将培养瓶放入细胞培养箱中。（注：不建议在解冻后稀释和离心细胞，因为这些操作对细胞的伤害比培养中残留的二甲基亚砜（DMSO）的影响更大。同时，细胞在PLL包被培养瓶中有助于促进细胞附着。）

换液：为了获得最佳结果，在培养开始后至少16小时内不要干扰培养。第二天更换培养基，以去除残留的二甲基亚砜和未附着的细胞，之后每隔三天更换一次培养基，直到培养达到约70%的密度，一旦培养达到约70%的密度，每隔一天更换一次培养基，直到培养达到约90%的密度。

传代：当细胞密度达到95%时进行传代。

1) 将T/E、包被培养瓶、DPBS、培养基提前置于室温平衡（不建议37℃加热）。

2) 弃除旧培养基，并用DPBS清洗细胞后吸除加入5 mL DPBS和5 mL 0.05% T/E solution 轻柔晃动培养瓶后放入37℃培养箱（注：原代细胞传代时请勿使用未稀释的胰蛋白酶），一段时间后镜下观察，待细胞完全变圆、脱落，轻轻拍打底部和侧面，加入2 mL FBS终止消化，将细胞悬液转移至15 mL离心管中，1000 rpm离心5 min，用新培养基重悬细胞沉淀后计数，根据5000 cells/cm²的密度传代至预先用PLL包被的培养瓶中。

生长条件

在CO₂浓度为5%，温度为37℃，相对湿度（RH）为95%的细胞培养箱中培养。

表 1 HrecF培养材料

参考文献

[1] Gabbiani G, Rungger-Brandle E. (1981) “The fibroblast.” In Glynn LE, Handbook of Inflammation, Vol. 3: Tissue Repair and Regeneration (pp 1-50). Amsterdam: Elsevier.

[2] Conrad GW, Hart GW, Chen Y. (1977) “Differences in vitro between fibroblast-like cells from cornea, heart, and skin of embryonic chicks.” J Cell Sci. 26: 119-137.

[3] Getliffe K, Martin Ruiz C, Passos JF, von Zglinicki T, Nwokolo C. (2006) “Extended lifespan and long telomeres in rectal fibroblasts from late-onset ulcerative colitis patients.” Eur J Gastroenterol Hepatol. 18(2): 133-141.

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