【ScienCell】人直肠微血管内皮细胞（HRecMEC）产品使用攻略

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小白求助前辈指路

人直肠微血管内皮细胞培养不成功、实验做不出来怎么办？新手小白迫切求助，希望各位前辈在文章下方留言，分享自己的经验，为小白们答疑解惑！

人直肠微血管内皮细胞

（HRecMEC）

人直肠位于下消化道，是粪便的临时储存地。直肠内皮细胞覆盖在血管内壁上，形成血管内、外间隔界面。内皮细胞限制细胞和溶质物质在血管和组织之间的通过，并在血管生成、血管新生和炎症反应中起关键作用。直肠微血管内皮细胞（RecMEC）被认为是直肠癌进展的主要促进因素，HRecMEC是研究血管生成机制和开发直肠癌治疗方法有效体外模型。

HRecMEC分离自人直肠组织，可通过vWF/Factor VIII和CD31 (PECAM1)特异性抗体免疫荧光染色进行鉴定。

培养方式

培养瓶：纤连蛋白（Bovine Plasma Fibronectin, 2 µg/cm²）包被培养瓶。

培养基：HRecMEC用提供的ECM完全培养基培养（包含基础培养基、5% FBS、1% ECGS和1% P/S）。

操作步骤

1) 包被纤连蛋白（2 µg/cm²）的培养瓶的准备（T-75培养瓶）：将5 mL无菌的Dulbecco's磷酸盐缓冲盐（DPBS）与150 µL纤连蛋白原液混匀后加入到T-75培养瓶中，将培养瓶放置在37°C的孵育箱中过夜（或至少2小时）。在铺细胞前将未凝固纤连蛋白溶液吸出（可重复使用2次），加入20 mL ECM完全培养基培养（基础培养基、FBS、ECGS和P/S按比例混合配制）。

2) 将解冻后的细胞加入至T-75中，十字交叉法平晃培养瓶使细胞均匀分布，置于细胞培养箱中培养。

换液：培养开始后至少16小时内不要干扰培养。第二天更换培养基，以去除残留的二甲基亚砜和未附着的细胞，此后每三天更换一次培养基，直到培养物达到大约70%的汇聚度。一旦培养物达到70%的汇聚度，每隔一天更换一次培养基，直到培养物达到大约90%的汇聚度，及时将细胞用于实验。

传代：当细胞密度达到90%时进行传代。

1) 将T/E、包被培养瓶、DPBS、培养基提前置于室温平衡（不建议37℃加热）。

2) 弃除旧培养基，并用DPBS清洗细胞后吸除加入8 mL DPBS和2 mL 0.05% T/E solution 轻柔晃动培养瓶后放入37℃培养箱（注：原代细胞传代时请勿使用未稀释的胰蛋白酶），一段时间后镜下观察，待细胞完全变圆、脱落，轻轻拍打底部和侧面，加入1 mL FBS，将细胞悬液转移至15 mL离心管中，1000 rpm离心5 min，用新培养基重悬细胞沉淀后计数，根据5000-7000 cells/cm²的密度传代至预先用Bovine Plasma Fibronectin包被的培养皿中。

生长条件

在CO₂浓度为5%，温度为37℃，相对湿度（RH）为95%的细胞培养箱中培养。

表 1 HRecMEC培养材料

参考文献

[1]Sumpio B, Riley J, Dardik A. (2002) “Cells in focus: endothelial cell.” Int J Biochem Cell Biol. 34(12): 1508-1512.

[2]Willett C, Duda D, Czito B, Bendell J, Clack J, Jain R. (2007) “Targeted therapy in rectal cancer.” Oncology. 21(9):1055-1065.

[3] Goldis D, Sferdian M, TarTă C, Fulger L, Totolici B, NeamTu C. (2015) “Comparative analysis of microvessel density quantified through the immunohistochemistry expression of CD34 and CD105 in rectal cancer.” Rom J Morphol Embryol. 56(2): 419-424.

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