【ScienCell】人胰腺微血管内皮细胞（HPaMEC）产品使用攻略

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小白求助前辈指路

人胰腺微血管内皮细胞培养不成功、实验做不出来怎么办？新手小白迫切求助，希望各位前辈在文章下方留言，分享自己的经验，为小白们答疑解惑！

人胰腺微血管内皮细胞

（HPaMEC）

胰腺是一种内分泌腺和消化器官，分泌激素并产生胰液以促进消化。胰腺内分泌细胞，也称为胰岛细胞，产生重要的激素，如胰高血糖素、胰岛素、胰淀素和生长激素抑制素。为了支持胰岛，胰腺是一个高度血管化的器官，内皮细胞在其中起着关键作用。胰腺微血管内皮细胞（PaMEC）不仅将氧气和营养物质输送到胰腺，还影响β细胞的增殖和功能，在胰岛发育过程中影响胰岛素基因表达，并产生与血管活性相关的各种生长因子。此外，PaMEC还参与优化血糖感知和调控。研究表明，PaMEC参与胰腺癌的发生发展。HPaMEC是研究胰岛生物学、胰腺癌、移植和再生医学的优秀体外模型。

HPaMEC分离自人胰腺组织，可通过vWF/Factor VIII和CD31 (PECAM)特异性抗体免疫荧光染色进行鉴定。

培养方式

培养瓶：纤连蛋白（Bovine Plasma Fibronectin, 2 µg/cm²）包被培养瓶。

培养基：HPaMEC用提供的ECM完全培养基培养（包含基础培养基、5% FBS、1% ECGS和1% P/S）。

操作步骤

1) 包被纤连蛋白（2 µg/cm²）的培养瓶的准备（T-75培养瓶）：将5 mL无菌的Dulbecco's磷酸盐缓冲盐（DPBS）与150 µL纤连蛋白原液混匀后加入到T-75培养瓶中，将培养瓶放置在37°C的孵育箱中过夜（或至少2小时）。在铺细胞前将未凝固纤连蛋白溶液吸出（可重复使用2次），加入20 mL ECM完全培养基培养（基础培养基、FBS、ECGS和P/S按比例混合配制）。

2) 将解冻后的细胞加入至T-75中，十字交叉法平晃培养瓶使细胞均匀分布，置于细胞培养箱中培养。

换液：培养开始后至少16小时内不要干扰培养。第二天更换培养基，以去除残留的二甲基亚砜和未附着的细胞，此后每三天更换一次培养基，直到培养物达到大约70%的汇聚度。一旦培养物达到70%的汇聚度，每隔一天更换一次培养基，直到培养物达到大约90%的汇聚度，及时将细胞用于实验。

传代：当细胞密度达到90%时进行传代。

1) 将T/E、包被培养瓶、DPBS、培养基提前置于室温平衡（不建议37℃加热）。

2) 弃除旧培养基，并用DPBS清洗细胞后吸除加入8 mL DPBS和2 mL 0.05% T/E solution 轻柔晃动培养瓶后放入37℃培养箱（注：原代细胞传代时请勿使用未稀释的胰蛋白酶），一段时间后镜下观察，待细胞完全变圆、脱落，轻轻拍打底部和侧面，加入1 mL FBS，将细胞悬液转移至15 mL离心管中，1000 rpm离心5 min，用新培养基重悬细胞沉淀后计数，根据5000-7000 cells/cm²的密度传代至预先用Bovine Plasma Fibronectin包被的培养皿中。

生长条件

在CO₂浓度为5%，温度为37℃，相对湿度（RH）为95%的细胞培养箱中培养。

表 1 HPaMEC培养材料

参考文献

[1] Zanone M, Favaro E, Camussi G. (2008) “From endothelial to beta cells: insights into pancreatic islet microendothelium.” Curr Diabetes Rev. 4(1): 1-9.

[2] Konstantinova I and Lammert E. (2004) “Microvascular development: learning from pancreatic islets.” Bioessays 26(10): 1069-1075.

[3] Nielsen M, Mortensen M, Detlefesen S. (2016) “Key players in pancreatic cancer stroma interaction: cancer-associated fibroblasts, endothelial and inflammatory cells. World J Gastroenterol 22(9): 2678-2700.

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