【ScienCell】人肠系膜成纤维细胞（HMeF）产品使用攻略
人肠系膜成纤维细胞培养不成功、实验做不出来怎么办？新手小白迫切求助，希望各位前辈在文章下方留言，分享自己的经验，为小白们答疑解惑！
人肠系膜成纤维细胞
（HMeF）
肠系膜在保护所有消化器官连接到腹腔后壁方面发挥着重要的功能作用，并产生细胞因子，在肠道神经系统发育过程中指导细胞迁移，同时还容纳脂肪干细胞。位于肠系膜中的成纤维细胞有助于维持结缔组织的结构完整性。在伤口愈合或肿瘤发展过程中，成纤维细胞可以激活并转变为肌成纤维细胞形态，合成高水平的细胞外基质。成纤维细胞与肠系膜纤维化和克罗恩病相关，然而，它们在这些疾病的发展和进展中的作用尚不明确，原代HMeF可用于研究系膜和成纤维细胞在系膜纤维化和克罗恩病中的作用。
HMeF分离自人肠系膜，其fibronectin特异性抗体免疫荧光染色呈阳性。
培养方式
培养瓶：PLL（多聚-L-赖氨酸）包被培养瓶。
培养基：HMeF用提供的FM完全培养基（包含基础培养基、2% FBS、1% FGS和1% P/S）培养。
操作方法
1) 包被PLL（2 μg/cm2）培养瓶（T-75培养瓶）的准备：将10 mL无菌水加入到T-75培养瓶中，加入15 μL PLL原液，轻轻吹匀后将培养瓶放置在37°C的孵育箱中过夜（或至少1小时）。
2) 无菌水清洗包被PLL的T-75 2次，加入20 mL FM完全培养基（基础培养基、FBS、FGS和P/S按比例混合配制），将解冻后的HMeF加入至包被的T-75中，十字交叉法轻柔摇晃培养瓶使细胞分布均匀，将培养瓶放入细胞培养箱中。（注：不建议在解冻后稀释和离心细胞，因为这些操作对细胞的伤害比培养中残留的二甲基亚砜（DMSO）的影响更大。同时，细胞在PLL包被培养瓶中有助于促进细胞附着。）
换液：为了获得最佳结果，在培养开始后至少16小时内不要干扰培养。第二天更换培养基，以去除残留的二甲基亚砜和未附着的细胞，之后每隔三天更换一次培养基，直到培养达到约70%的密度，一旦培养达到约70%的密度，每隔一天更换一次培养基，直到培养达到约90%的密度。
传代：当细胞密度达到95%时进行传代。
1) 将T/E、包被培养瓶、DPBS、培养基提前置于室温平衡（不建议37℃加热）。
2) 弃除旧培养基，并用DPBS清洗细胞后吸除加入5 mL DPBS和5 mL 0.05% T/E solution 轻柔晃动培养瓶后放入37℃培养箱（注：原代细胞传代时请勿使用未稀释的胰蛋白酶），一段时间后镜下观察，待细胞完全变圆、脱落，轻轻拍打底部和侧面，加入2 mL FBS终止消化，将细胞悬液转移至15 mL离心管中，1000 rpm离心5 min，用新培养基重悬细胞沉淀后计数，根据5000 cells/cm2的密度传代至预先用PLL包被的培养瓶中。
生长条件
在CO2浓度为5%，温度为37℃，相对湿度（RH）为95%的细胞培养箱中培养。
表 1 HMeF培养材料
参考文献
[1] Gabbiani G, Rungger-Brandle E. (1981) “The fibroblast.” In Glynn LE, Handbook of Inflammation, Vol. 3: Tissue Repair and Regeneration (pp 1-50). Amsterdam: Elsevier.
[2] Li Y, Zhu W, Zuo L, Shen B. (2016) “The role of the mesentery in Crohn’s disease: the contributions of nerves, vessels, lymphatics, and fat to the pathogenesis and disease course.” Inflamm Bowl Dis 22(6): 1483-1495.
[3] Koumarianou A, Alexandraki K, Wallin G, Kaltsas G, Daskalakis K. (2020) “Pathogenesis and clinical management of mesenteric fibrosis in small intestinal neuroendocrine neoplasms: a systematic review.” J Clin Med 9(6): 1777.
其他细胞品类
别划走，精彩继续
长按识别
添加一对一专属技术支持
扫码进群
咨询详细产品信息
点在看，传递你的品味
