【ATCC】人支气管上皮细胞（HBEpiC）培养基的配制

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人原代细胞 Human Primary cells 肺细胞系统 Pulmonary Cell System ATCC 人支气管上皮细胞 Bronchial Epithelial Cells Airway Epithelial Cell Basal Medium

小白求助前辈指路

人支气管上皮细胞培养不成功、实验做不出来怎么办？新手小白迫切求助，希望各位前辈在文章下方留言，分享自己的经验，为小白们答疑解惑！

人支气管上皮细胞

（HBEpiC）

呼吸道上皮由从近端到远端由纤毛、非纤毛和粘液分泌细胞组成的混合细胞群组成。这些细胞的个体特征不仅创造了对抗各种有毒物质的有效物理屏障，而且通过产生和释放大量的化学介质和细胞因子，创造了高度复杂的宿主防御系统。支气管上皮由表面上皮细胞和黏液腺组成。表面上皮细胞由三种主要细胞类型组成：基底细胞、杯状细胞和纤毛细胞，其中后两者形成基底上柱状结构，是黏液纤毛清除所必需的。呼吸上皮细胞负责润滑肺部、保持湿度和清洁呼吸道。它们是药物、毒素和致癌物的重要靶点。此外，它们还与许多疾病如囊性纤维化有关。使用支气管上皮细胞（BepiC）的研究表明，IL-4和IL-13刺激可以改变细胞增殖、纤毛跳动和黏液产生。BepiC的增殖也部分受EGF受体信号的调控。培养的HBEpiC是研究支气管上皮功能和病理生理的体外模型。HBEpiC分离自人支气管，其cytokeratin-18和cytokeratin-19的特异性抗体免疫荧光染色呈阳性。

完全培养基的配制

1)从冰箱中取出生长试剂盒（暂时储存温度为-20℃，长期保存温度为-80℃），确保所有组分的盖子都是紧闭的。

2)在将生长试剂盒的组分加入基础培养基之前，将其解冻。需要将L-谷氨酰胺组分在37°C的水浴中加热，并摇动以充分混匀，再加入至基础培养基中。

3)取出一瓶Airway Epithelial Cell Basal Medium（485 mL，2-8℃储存）。

4)使用70%乙醇喷雾剂对生长试剂盒组分瓶和基础培养基瓶的外部表面进行消毒。

5)层流罩或生物安全柜中无菌操作，使用单独的无菌移液管将每个生长试剂盒组分转移到基础培养基瓶中，并充分混匀，避免气泡产生，2-8℃避光保存（可稳定储存30天）。

6)抗菌剂和酚红不是必需的，但如果需要的话可以添加。建议将可选组分（GA溶液或PSA溶液）的体积加入完全生长培养基中，具体建议如下。

①庆大霉素-两性霉素B溶液（Gentamicin-Amphotericin B Solution），0.5 mL（最终浓度：庆大霉素：10 µg/mL，两性霉素B：0.25 µg/mL）。

②青霉素-链霉素-两性霉素B溶液（Penicillin-Streptomycin-Amphotericin B Solution），0.5 mL（最终浓度：青霉素：10 Units/mL，链霉素：10 µg/mL，两性霉素B：25 ng/mL）。

③酚红（Phenol Red），0.5 mL（最终浓度：33 µM）。

表1 HBEpiC培养材料