【ScienCell】人支气管成纤维细胞（HBF）产品使用攻略
人支气管成纤维细胞培养不成功、实验做不出来怎么办？新手小白迫切求助，希望各位前辈在文章下方留言，分享自己的经验，为小白们答疑解惑！
人支气管成纤维细胞
（HBF）
成纤维细胞是支气管中最丰富的细胞类型。支气管成纤维细具有间充质干细胞的表型，其主要功能是产生Ⅲ型胶原、弹性蛋白和细胞外基质的蛋白聚糖，并在损伤后的修复和重塑过程中发挥重要作用，其中成纤维细胞向炎症部位的可控聚集对于损伤后有效的组织修复至关重要。成纤维细胞的分泌的胶原蛋白不足或过度积累均可导致组织功能异常，例如，由支气管上皮下纤维化引起的过度成纤维细胞增殖和胶原分泌可导致气道阻塞和支气管高反应性。HBF分离自人支气管组织，其fibronectin特异性免疫抗体呈阳性。
培养方式
培养瓶：PLL（多聚-L-赖氨酸）包被培养瓶。
培养基：HBF用提供的FM完全培养基（包含基础培养基、2% FBS、1FGS和1% P/S）培养。
操作方法
1) 包被PLL（2 μg/cm2）培养瓶（T-75培养瓶）的准备：将10 mL无菌水加入到T-75培养瓶中，加入15 μL PLL原液，轻轻吹匀后将培养瓶放置在37°C的孵育箱中过夜（或至少1小时）。
2) 无菌水清洗包被PLL的T-75 2次，加入20 mL FM完全培养基（基础培养基、FBS、FGS和P/S按比例混合均匀），将解冻后的HBF加入至包被的T-75中，十字交叉法轻柔摇晃培养瓶使细胞分布均匀，将培养瓶放入细胞培养箱中。（注：不建议在解冻后稀释和离心细胞，因为这些操作对细胞的伤害比培养中残留的二甲基亚砜（DMSO）的影响更大。同时，细胞在PLL包被培养瓶中有助于促进细胞附着。）
换液：为了获得最佳结果，在培养开始后至少16小时内不要干扰培养。第二天更换培养基，以去除残留的二甲基亚砜和未附着的细胞，之后每隔三天更换一次培养基，直到培养达到约70%的密度，一旦培养达到约70%的密度，每隔一天更换一次培养基，直到培养达到约90%的密度。
传代：当细胞密度达到95%时进行传代。
1) 将T/E、包被培养瓶、DPBS、培养基提前置于室温平衡（不建议37℃加热）。
2) 弃除旧培养基，并用DPBS清洗细胞后吸除加入5 mL DPBS和5 mL 0.05% T/E solution 轻柔晃动培养瓶后放入37℃培养箱（注：原代细胞传代时请勿使用未稀释的胰蛋白酶），一段时间后镜下观察，待细胞完全变圆、脱落，轻轻拍打底部和侧面，加入2 mL FBS终止消化，将细胞悬液转移至15 mL离心管中，1000 rpm离心5 min，用新培养基重悬细胞沉淀后计数，根据5000 cells/cm2的密度传代至预先用PLL包被的培养瓶中。
生长条件
在CO2浓度为5%，温度为37℃，相对湿度（RH）为95%的细胞培养箱中培养。
表 1 HBF培养材料
参考文献
[1] Sabatini F, Petecchia L, Tavian M, Jodon de Villeroche V, Rossi GA,. Brouty-Boye D. (2005) “Human bronchial fibroblasts exhibit a mesenchymal stem cell phenotype and multilineage differentiating potentialities.” Lab Invest 85(8): 962-71.
[2] Kuwano K, Hagimoto N, Hara N. (2001) “Molecular mechanisms of pulmonary fibrosis and current treatment.” Curr Mol Med 1(5): 551-73.
[3] Hoshino M, Nakamura Y, Sim J, Isoqai S. (1998) “Bronchial subepithelial fibrosis and expression of matrix metalloproteinase-9 in asthmatic airway inflamaiton.” J Allergy Clin Immunol 102(5): 783-8.
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