【Lonza】人肾近曲小管上皮细胞（HRPTEpiC）产品使用攻略

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人原代细胞 Human Primary cells 肾脏细胞系统 Renal Cell System Lonza 人肾近曲小管上皮细胞 Renal Proximal Tubular Epithelial Cells Basal Medium Renal Epithelial Cell Growth Medium CC-3190 CC-3191

小白求助前辈指路

人肾近曲小管上皮细胞培养不成功、实验做不出来怎么办？新手小白迫切求助，希望各位前辈在文章下方留言，分享自己的经验，为小白们答疑解惑！

人肾近曲小管上皮细胞

（HRPTEpiC）

肾脏近曲小管上皮细胞（PTEpiC）在肾功能中发挥着至关重要的作用，它们重吸收肾小球滤液中几乎所有的葡萄糖和氨基酸，同时允许其他没有营养价值的物质在尿液中排泄，并在多种先天性、代谢性和炎症性疾病的损伤部位附近存在。PTEpiC可产生细胞因子和趋化因子等炎症介质，通过产生IL-8影响和引导白细胞趋化，积极参与急性炎症过程。PTEpiC在炎症、肾移植后或新月体性肾小球肾炎中表达IL2R α和MHCⅡ类抗原。HPTEpiC的培养为研究肾小管细胞与肾脏疾病的关系提供了体外模型。HRPTEpiC的cytokeratin-18和cytokeratin-19特异性抗体免疫荧光染色呈阳性。

培养方式

培养基：用提供的完全培养基（包含Basal Medium和其他补充剂）培养。

操作步骤

1) 完全培养基的配制：将室温融化的补充剂用移液器上下轻柔混匀，并全部加入到Basal Medium中并混合均匀，4℃避光保存。

2) T-25中加入5 mL完全培养基。在细胞播种前，在细胞培养箱中预平衡至少30 min。将解冻后的细胞转移到预热的完全培养基中（按2500 cells/cm²的密度），并置于细胞培养箱中培养。

换液：在培养开始后至少16小时内不要干扰培养。第二天更换培养基，以去除残留的二甲基亚砜和未附着的细胞，之后每隔三天更换一次培养基。

传代：当细胞密度60%~80%时进行传代。

1) 将T/E、HEPES、TNS和培养基提前置于室温平衡（不建议37℃加热）。

2) 弃除旧培养基，并用5 ml HEPES清洗细胞后吸除，加入2 mL Trypsin/EDTA溶液。室温下分离细胞（2-6 min），用显微镜检查细胞。当超过90%的细胞开始脱落时，轻轻敲击容器的侧面以松动剩余的细胞，加入4 mL TNS并轻轻摇动，小心地吸取细胞悬浮液并快速转移到15 mL离心管中。用2 ml HEPES收集残余的细胞并转移至离心管中。以220×g的速度离心细胞5 min。弃掉上清液，加入2-3 mL完全培养基，并通过小心地上下吸移来重悬细胞并对活细胞计数。按2500 cells/cm²接种密度将细胞分装到预先预热至37°C的含完全培养基的培养瓶（1 ml/5 cm²的量添加培养基），或根据实验设计安排种植密度，并放入培养箱中培养，每两到三天更换培养基。（传代后至单层细胞需要5-9天）

生长条件

在CO₂浓度为5%，温度为37℃，相对湿度（RH）为95%的细胞培养箱中培养。

表 1 HRPTEpiC培养材料

参考文献

[1] van Kooten C, van der Linde X, Woltman AM, van Es LA, Daha MR. (1999) “Synergistic effect of interleukin-1and CD40L on the activation of human renal tubular epithelial cells.” Kidney Int. 56(1):41-51.

[2] Schmouder RL, Strieter RM, Wiggins RC, Chensue SW, Kunkel SL. (1992 ) “In vitro and in vivo interleukin-8 production in human renal cortical epithelia.” Kidney Int. 41(1):191-8.

[3] Wuthrich RP, Glimcher LH, Yui MA, Jevnikar AM, Dumas SE, Kelley VE. (1990) MHC class II, antigen presentation and tumor necrosis factor in renal tubular epithelial cells. Kidney Int. 37(2):783-92.

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