【ScienCell】人前体脂肪细胞（HPA）产品使用攻略

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小白求助前辈指路

人前体脂肪细胞培养不成功、实验做不出来怎么办？新手小白迫切求助，希望各位前辈在文章下方留言，分享自己的经验，为小白们答疑解惑！

人前体脂肪细胞

（HPA）

脂肪细胞在能量储存和代谢中起着重要作用。脂肪细胞分化是一个对代谢稳态和营养信号传导至关重要的发育过程，受到基因表达和信号转导等复杂作用的调控。脂肪组织中的前脂肪细胞在成年期始终存在，并且可增殖和分化为成熟的脂肪细胞，从而增加脂肪组织的质量。体外研究表明，不同组织来源的前脂肪细胞在脂质积累、脂肪生成转录因子表达和TNFα诱导的凋亡方面存在差异。脂肪细胞分化与众多生理和病理过程密切相关，包括脂肪代谢、肥胖、糖尿病、高脂血症和乳腺癌。HPA分离自内脏脂肪或皮下脂肪组织，其CD44和CD90免疫荧光染色呈阳性，且分化后脂质染色呈阳性。

培养方式

Preadipocyte Medium (PAM, Cat. #7211)用于体外培养HPA-v。Preadipocyte Differentiation Medium (PADM, Cat. #7221)用于将前体脂肪细胞体外分化为成熟的脂肪细胞，随后使用Adipocyte Medium (AdM, Cat. #7201)来维持分化后的成熟脂肪细胞。

HPA的培养

培养瓶：PLL（多聚-L-赖氨酸）包被培养瓶。

培养基：HPA用提供的Preadipocyte Medium（PAM）完全培养基（包含基础培养基、5% FBS、1% PAGS和1% P/S）培养。

操作步骤：

1) 包被PLL（2 μg/cm²）培养瓶（T-75培养瓶）的准备：将10 mL无菌水加入到T-75培养瓶中，加入15 μL 多聚-L-赖氨酸原液，轻轻吹匀后将培养瓶放置在37°C的孵育箱中过夜（或至少1小时）。

2) 完全培养基的准备：将PAM基础培养基与FBS、PAGS和P/S按比例混合。

2) 无菌水清洗包被PLL的T-75 2次，加入20 mL完全培养基，将解冻后的HPA加入至包被的T-75中，十字交叉法轻柔摇晃培养瓶使细胞分布均匀，将培养瓶放入细胞培养箱中。（注：不建议在解冻后稀释和离心细胞，因为这些操作对细胞的伤害比培养中残留的二甲基亚砜（DMSO）的影响更大。同时，将细胞放置在PLL涂层的培养瓶中有助于促进细胞附着。）

换液：为了获得最佳结果，在培养开始后至少16小时内不要干扰培养。第二天更换培养基，以去除残留的二甲基亚砜和未附着的细胞，之后每隔三天更换一次培养基，直到培养达到约70%的密度，一旦培养达到约70%的密度，每隔一天更换一次培养基，直到培养达到约90%的密度。

传代：当细胞密度达到90%-95%时进行传代。

1) 将T/E、DPBS、培养基提前置于室温平衡（不建议37℃加热）。

2) 弃除旧培养基，并用DPBS清洗细胞后吸除，加入5 mL DPBS和5 mL 0.05% T/E solution 轻柔晃动培养瓶后放入37℃培养箱，一段时间后镜下观察，待细胞完全变圆、脱落，轻轻拍打底部和侧面，加入2 mL FBS（#0500）终止消化，将细胞悬液转移至15 mL离心管中，1000 rpm离心5 min，用新培养基重悬细胞沉淀后计数，根据5000 cells/cm²的密度传代至预先用PLL包被的培养瓶中。

生长条件：在CO₂浓度为5%，温度为37℃，相对湿度（RH）为95%的细胞培养箱中培养。

表1 HPA培养材料

参考文献

[1] Tominaga K, Johmura Y, Nishizuka M, Imagawa M. (2004) “Fad24, a mammalian homolog of Noc3p, is a positive regulator in adipocyte differentiation.” J Cell Sci. 117(Pt 25):6217-26.

[2] Reue K, Glueck SB. (2001) “Accumulating evidence for differences during preadipocyte development: Focus on differential gene expression in white and brown preadipocytes.” Physiol Genomics. 7(1):1-2.

[3] Tchkonia T, Tchoukalova YD, Giorgadze N, Pirtskhalava T, Karagiannides I, Forse RA, Koo A, Stevenson M, Chinnappan D, Cartwright A, Jensen MD, Kirkland JL. (2005) “Abundance of Two Human Preadipocyte Subtypes with Distinct Capacities for Replication, Adipogenesis, and Apoptosis Varies among Fat Depots.” Am J Physiol Endocrinol Metab.

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