【PromoCell】人心肌细胞（HCM）产品使用攻略

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小白求助前辈指路

人心肌细胞培养不成功、实验做不出来怎么办？新手小白迫切求助，希望各位前辈在文章下方留言，分享自己的经验，为小白们答疑解惑！

人心肌细胞

（HCM）

心肌细胞是身体中最具有活力的细胞，是具有高氧含量的高度专业化细胞，拥有大量的线粒体，占据心脏质量的75％，但仅占心脏总细胞数的三分之一左右。分化的心肌细胞几乎没有增殖能力；然而，α1-肾上腺素通过Ras/MEK途径可刺激心肌细胞的肥大生长。所有心肌细胞都能够自发地产生节律性的膜去极化和复极化。心肌细胞内存在着一个复杂的信号网络，调节着心脏的节律性收缩。心肌细胞肥大和凋亡被认为是心力衰竭期间收缩功能丧失的原因。HCM的培养，有助于对心脏信号网络有更好的理解，并有助于揭示调节心肌细胞死亡的细胞机制。HCM的sarcomeric α-actinin特异性抗体免疫荧光染色呈阳性。

培养方式

Human Cardiac Myocytes（#C-12810）分离自成年人心室。

培养基：用提供的Myocyte Growth Medium完全培养基（包含Basal Medium和5% Fetal Calf Serum及其他补充剂）培养。

操作步骤：

1) 完全培养基的配制：将室温融化的补充剂加入到Basal Medium中并混匀，4℃避光保存。

2) T-25中加入10 mL Myocyte Growth Medium完全培养基，在细胞播种前，在37°C和5%二氧化碳培养箱中预平衡至少30 min。将解冻后的细胞转移到预热的完全培养基中，并置于细胞培养箱中培养

换液：在培养开始后至少16小时内不要干扰培养。第二天更换培养基，以去除残留的二甲基亚砜和未附着的细胞，之后每隔三天更换一次培养基。

传代：当细胞密度>70%时进行传代。

1)将T/E、HBSS、TNS和培养基提前置于室温平衡（不建议37℃加热）。

2)弃除旧培养基，并用HBSS清洗细胞后吸除，加入2.5 mL Trypsin/EDTA溶液。室温下分离细胞，用显微镜检查细胞。当超过90%的细胞开始脱落时，轻轻敲击容器的侧面以松动剩余的细胞，加入2.5 mL TNS并轻轻摇动，小心地吸取细胞悬浮液并转移到15 mL离心管中。以220×g的速度离心细胞5 min。弃掉上清液，加入1 mL完全培养基，并通过小心地上下吸移来重悬细胞。按10,000~15,000 cells/cm²接种密度将细胞分装到预先预热至37°C的含完全培养基的培养瓶（1 ml/5 cm²的量添加培养基），或根据实验设计安排种植密度，并放入培养箱中培养，每两到三天更换培养基。

生长条件：在CO₂浓度为5%，温度为37℃，相对湿度（RH）为95%的细胞培养箱中培养。

表1 HCM培养材料

参考文献

[1] Bodyak N, Kang PM, Hiromura M, Sulijoadikusumo I, Horikoshi N, Khrapko K, Usheva A. (2002) “Gene expression profiling of the aging mouse cardiac myocytes.” Nucleic Acids Research. 30: 3788-94.

[2] Tamamori-Adachi M, Ito H, Nobori K, Hayashida K, Kawauchi J, Adachi S, Ikeda MA, Kitajima S. (2002) “Expression of cyclin D1 and CDK4 causes hypertrophic growth of cardiomyocytes in culture: a possible implication for cardiac hypertrophy.” Biochem Biophys Res Commun. 296: 274-80.

[3] Sambrano GR, Fraser I, Han H, Ni Y, O'Connell T, Yan Z, Stull JT. (2002) “Navigating the signaling network in mouse cardiac myocytes.” Nature. 420: 712-4.

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