【Lonza】人主动脉外膜成纤维细胞（HAAF）产品使用攻略

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人主动脉外膜成纤维细胞 HAAF 人原代细胞 Human Primary cells 心脏细胞系统 Cardiac Cell System Lonza Aortic Adventitial Fibroblasts Stromal Cell Growth Medium CC-3205

小白求助前辈指路

人主动脉外膜成纤维细胞培养不成功、实验做不出来怎么办？新手小白迫切求助，希望各位前辈在文章下方留言，分享自己的经验，为小白们答疑解惑！

人主动脉外膜成纤维细胞

（HAAF）

血管外膜中，外膜成纤维细胞（AF）通过产生胶原蛋白提供结构支持，最外层的结缔组织覆盖血管，将血管锚定到附近的组织中。AF是血管壁中第一个对高血压和血管损伤刺激作出反应并进行增殖的细胞。在病理情况下，AF产生细胞因子和趋化因子，诱导免疫细胞大量浸润到血管壁的外膜层中，进而引发外膜炎症，并可能导致心血管疾病。AF的培养是研究心血管疾病发病机制和开发新的疾病治疗方法的理想工具。HAAF分离自人主动脉，其fibronectin特异性抗体免疫荧光染色呈阳性。

培养方式

培养基：用提供的完全培养基（包含Basal Medium和5%FBS及其他补充剂）培养。

操作步骤：

1) 完全培养基的配制：将室温融化的补充剂用移液器上下轻柔混匀，并全部加入到Basal Medium中并混合均匀，4℃避光保存。

2) T-25中加入10 mL完全培养基。在细胞播种前，在37°C和5%二氧化碳培养箱中预平衡至少30 min。将解冻后的细胞转移到预热的完全培养基中，并置于细胞培养箱中培养。

换液：在培养开始后至少16小时内不要干扰培养。第二天更换培养基，以去除残留的二甲基亚砜和未附着的细胞，之后每隔三天更换一次培养基。

传代：当细胞密度70%~90%时进行传代。

1)将T/E、HEPES、TNS和培养基提前置于室温平衡（不建议37℃加热）。

2)弃除旧培养基，并用HEPES清洗细胞后吸除，加入2.5 mL Trypsin/EDTA溶液。室温下分离细胞，用显微镜检查细胞。当超过90%的细胞开始脱落时，轻轻敲击容器的侧面以松动剩余的细胞，加入5 mL TNS并轻轻摇动，小心地吸取细胞悬浮液并转移到15 mL离心管中。以220×g的速度离心细胞5 min。弃掉上清液，加入1 mL完全培养基，并通过小心地上下吸移来重悬细胞。按3500 cells/cm²接种密度将细胞分装到预先预热至37°C的含完全培养基的培养瓶（1 ml/5 cm²的量添加培养基），或根据实验设计安排种植密度，并放入培养箱中培养，每两到三天更换培养基。（从传代至细胞单层需6-9天）

生长条件：在CO₂浓度为5%，温度为37℃，相对湿度（RH）为95%的细胞培养箱中培养。

表1 HAAF培养材料

参考文献

[1] Stenmark KR, Yeager ME, El Kasmi KC, Nozik-Grayck E, Gerasimovskaya EV, Li M, Riddle SR, Frid MG. (2013) “The adventitia: essential regulator of vascular wall structure and function.” Annu Rev Physiol. 75: 23-47.

[2] Maiellaro K, Taylor WR. (2007) “The role of the adventitia in vascular inflammation.” Cardiovasc Res. 75: 640-8.

[3] Tieu BC, Ju X, Lee C, Sun H, Lejeune W, Recinos A 3rd, Brasier AR, Tilton RG. (2011) “Aortic adventitial fibroblasts participate in angiotensin-induced vascular wall inflammation and remodeling.” J Vasc Res. 48: 261-72.

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