【ScienCell】心脏微血管内皮细胞（HCMEC）产品使用攻略

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小白求助前辈指路

心脏微血管内皮细胞培养不成功、实验做不出来怎么办？新手小白迫切求助，希望各位前辈在文章下方留言，分享自己的经验，为小白们答疑解惑！

心脏微血管内皮细胞

（ HCMEC）

心脏微血管内皮细胞（CMEC）在心肌功能中起着重要作用。CMEC通过释放和降解内皮源性血管活性因子来调节血管张力，并通过其酶活性调节血管收缩剂和血管舒张剂的局部水平。此外，微血管参与白细胞招募、炎症和血管生成的调节，且能够向肌成纤维细胞转分化，进而在基质异常积累和纤维化疾病中发挥作用。CMEC的培养为了解CMEC在心脏功能和疾病中的生理和病理相关性提供体外模型。HCMEC的vWF/Factor VIII和CD31 (PECAM1)的特异性免疫荧光染色呈阳性。

培养方式

培养瓶：包被纤连蛋白（Bovine Plasma Fibronectin，2 µg/cm²）的培养瓶。

培养基：HCMEC用提供的ECM完全培养基（包括基础培养基、2% FBS、1% ECGS和1% P/S）培养。

操作步骤：

1) 包被纤连蛋白（2 µg/cm²）培养瓶的准备（T-75培养瓶）：将5 mL无菌的Dulbecco's磷酸盐缓冲盐（DPBS）与150 µL纤连蛋白原液混匀后加入到T-75培养瓶中，将培养瓶放置在37°C的孵育箱中过夜（或至少2小时）。在铺细胞前将未凝固纤连蛋白溶液吸出（可重复使用2次），加入20 mL ECM完全培养基（基础培养基、FBS、ECGS和P/S按比例混合配制）。

2) 将解冻后的HCMEC加入培养瓶，十字交叉法轻柔平晃培养瓶，使细胞分散均匀。（注：不建议在解冻后对细胞进行稀释和离心，因为这些与培养物中残留DMSO的作用相比，这些作用对细胞的损伤更大；将HCMEC置于纤连蛋白包被的培养瓶中，促进生长同样重要。）

换液：培养开始后16小时内不要干扰培养。次日更换培养液，去除残留的DMSO和未贴壁细胞。之后每三天更换一次培养基，直到培养达到大约70%的密度。一旦培养达到大约70%的密度，每隔一天更换一次培养基，直到培养达到大约90%的密度。

传代：当细胞密度达到90%时进行传代。

1) 将T/E、包被培养瓶、DPBS、培养基提前置于室温平衡（不建议37℃加热）。

2) 弃除旧培养基，并用DPBS清洗细胞后吸除加入8 mL DPBS和2 mL 0.05% T/E solution 轻柔晃动培养瓶后放入37℃培养箱（注：原代细胞传代时请勿使用未稀释的胰蛋白酶），一段时间后镜下观察，待细胞完全变圆、脱落，轻轻拍打底部和侧面，加入2 mL FBS，将细胞悬液转移至15 mL离心管中，1000 rpm离心5 min，用新培养基重悬细胞沉淀后计数，根据6000-8000 cells/cm²的密度传代至预先用纤连蛋白包被的培养瓶中。

生长条件：在CO₂浓度为5%，温度为37℃，相对湿度（RH）为95%的细胞培养箱中培养。

表1 HCMEC培养材料