【ScienCell】人核心髓核细胞（HNPC）产品使用攻略
人核心髓核细胞培养不成功、实验做不出来怎么办？新手小白迫切求助，希望各位前辈在文章下方留言，分享自己的经验，为小白们答疑解惑！
人核心髓核细胞
（HNPC）
椎间盘的核心部分是核心髓核，它是一种类似果冻的物质，受压载荷下，可在每个椎间盘中向各个方向分布液压压力。核心髓核由胶原纤维、蛋白聚糖聚集素和核心髓核细胞组成。核心髓核细胞生活在血液供应有限的环境中，并通过无氧糖酵解产生能量，并合成胶原II和X，表达缺氧诱导因子-1，及分泌白细胞介素-1、-6、-10和粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子。核心髓核细胞在受到机械应力的刺激下会促进细胞增殖。核心髓核细胞为研究椎间盘退行性变、组织工程和脊椎间盘疾病的细胞和分子事件提供了体外模型。HNPC分离自人椎间盘髓核，其fibronectin和vimentin的免疫荧光染色呈阳性。
HNPC培养方式
培养瓶：PLL（多聚-L-赖氨酸）包被的培养瓶。
培养基：HNPC用提供的NPCM完全培养基（包含基础培养基、2% FBS、1% NPCGS和1% P/S）培养。
操作步骤：
1) 包被PLL（2 μg/cm2）培养瓶（T-75培养瓶）的准备：将10 mL无菌水加入到T-75培养瓶中，加入15 μL PLL原液，轻轻吹匀后将培养瓶放置在37°C的孵育箱中过夜（或至少1小时）。
2) 无菌水清洗包被PLL的T-75 2次，加入20 mL完全培养基，将解冻后的HNPC加入至包被的T-75中，十字交叉法轻柔摇晃培养瓶使细胞分布均匀，将培养瓶放入细胞培养箱中。（注：不建议在解冻后稀释和离心细胞，因为这些操作对细胞的伤害比培养中残留的二甲基亚砜（DMSO）的影响更大。同时，将细胞置于PLL涂层培养有助于促进细胞附着。）
换液：为了获得最佳结果，在培养开始后至少16小时内不要干扰培养。第二天更换培养基，以去除残留的二甲基亚砜和未附着的细胞，之后每隔三天更换一次培养基，直到培养达到约70%的密度，一旦培养达到约70%的密度，每隔一天更换一次培养基，直到培养达到约90%的密度。
传代：当细胞密度达到90%-95%时进行传代。
1) 将T/E、DPBS、培养基提前置于室温平衡（不建议37℃加热）。
2) 弃除旧培养基，并用DPBS清洗细胞后吸除，加入5 mL DPBS和5 mL 0.05% T/E solution 轻柔晃动培养瓶后放入37℃培养箱，一段时间后镜下观察，待细胞完全变圆、脱落，轻轻拍打底部和侧面，加入2 mL FBS（#0500）终止消化，将细胞悬液转移至15 mL离心管中，1000 rpm离心5 min，用新培养基重悬细胞沉淀后计数，根据5000 cells/cm2的密度传代至预先用PLL包被的培养瓶中。
生长条件：在CO2浓度为5%，温度为37℃，相对湿度（RH）为95%的细胞培养箱中培养。
表 1 HNPC培养材料
参考文献
[1] Agrawal A, Guttapalli A, Narayan S, Albert TJ, Shapiro IM, Risbud MV. (2007) “Normoxic stabilization of HIF-1α drives glycolytic metabolism and regulates aggrecan gene expression in nucleus pulposus cells of the rat intervertebral disk.” Am J Physiol Cell Physiol 293: C621-C631.
[2] Torsten K, Thomas N, Christoph G, Tatiana G. (2005) “Human anulus fibrosis and nucleus pulposus cells of the intervertebral disc: effect of degeneration and culture system on cell phenotype.” Spine 30(24):2743-2748.
[3] Takuji M, Mamoru K, Koichi K, Toru T, Tetsuya T. (1999) “Cyclic mechanical stretch stress increases the growth rate and collagen synthesis of nucleus pulposus cells in vitro.” Spine 24(4):315-319.
其他细胞品类
别划走，精彩继续
长按识别
添加一对一专属技术支持
扫码进群
咨询详细产品信息
点在看，传递你的品味
