【ScienCell】人神经元—海马（HN-h）产品使用攻略
人神经元—海马培养不成功、实验做不出来怎么办？新手小白迫切求助，希望各位前辈在文章下方留言，分享自己的经验，为小白们答疑解惑！
人神经元—海马
（HN-h）
人脑约含有1 x 1011个神经元，每个神经元能够与至少10,000个其他神经元进行联系。海马神经元在学习和记忆中发挥着特殊的作用。培养的HN-h是研究神经现象（如分化、存活、进程生长和突触形成）的优秀模型。HNh分离自人脑海马体，其β-tubulin III特异性抗体免疫荧光染色呈阳性。
培养方式
在解冻HN-h细胞之前，应安排好实验。HN-h细胞无法增殖，不能进行传代。
培养板：PLL包被的培养板（6 well、12 well或24 well plate）。
培养基：HN-h用提供的NM完全培养基（包含基础培养基，1% NGS和1%P/S）培养。
操作步骤：
1) 包被PLL（2 μg/cm2）培养板的准备（如6 孔板）：6孔板的一个孔加入2 mL无菌水和20 μL PLL原液，轻轻吹匀后将培养瓶放置在37°C的孵育箱中过夜（或至少1小时）。
2) 完全培养基的准备：将添加物按比例加入到基础培养基中。
3) 将解冻后的HN吸至配好的适当的完全培养基中（3 mL/孔），轻轻翻转试管1-2次，以获得培养基中的均质细胞悬浮液（不建议通过上下吹打来重悬原代神经元）。
4) 将细胞悬液按3 mL/孔的量加入至6孔板中，十字交叉法轻柔摇晃培养瓶使细胞分布均匀，将培养瓶放入细胞培养箱中。（注：不建议在解冻后稀释和离心细胞，因为这些操作对细胞的伤害比培养中残留的二甲基亚砜（DMSO）的影响更大。同时，将细胞置于PLL涂层培养有助于促进细胞附着。）
换液：为了获得最佳结果，在细胞培养开始后至少16小时内不要干扰培养。第二天更换培养基，以去除残留的二甲基亚砜（DMSO）和未附着的细胞，之后每隔一天更换培养基。细胞可能需要几天的时间才能在培养物中生长出神经突起。
生长条件：在CO2浓度为5%，温度为37℃，相对湿度（RH）为95%的细胞培养箱中培养。
表1 HN-h培养材料
参考文献
[1] Parent A. (1996) “Neurons.” In Carpenter's Human Neuroanatomy (9th ed., pp131-198). Quebec: Williams & Wilkins.
[2] Alberts B, Bray D, Lewis J, Raff M, Roberts M, Watson JD. (1989) Molecular Biology of the Cell (2nd ed.).New York: Garland.
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