【ScienCell】人小脑颗粒细胞（HCGC）产品使用攻略
人小脑颗粒细胞培养不成功、实验做不出来怎么办？新手小白迫切求助，希望各位前辈在文章下方留言，分享自己的经验，为小白们答疑解惑！
人小脑颗粒细胞
（ HCGC）
小脑的发育涉及一系列协调的细胞运动和两个独立的增殖区域：脑室区和外颗粒细胞层（EGL），一种来自菱形唇的祖细胞池。在早期小脑形成过程中，EGL呈现出分离状态，并且只产生颗粒细胞。小脑颗粒细胞（Cerebellar Granule Cells, CGC）是脑中数量最多的神经元，人类大约有1 x 1011个。它们的轴突沿冠状轴线呈平行纤维排列，这种排列导致的兴奋在一维方向上的传播是小脑功能理论的关键假设。CGC从高尔基细胞接受抑制性突触输入，这些输入通过γ-氨基丁酸（GABA）介导。在体内和体外发育过程中，CGC依赖NMDA型谷氨酸受体的活性来实现存活和完全分化。培养的CGC被广泛用作研究神经元凋亡的模型系统。HCGC从人小脑中分离获取，其β-tubulin III特异性抗体免疫荧光染色呈阳性。
培养方式
在解冻HCGC细胞之前，实验应进行良好的组织安排。因为HCGC细胞无法增殖，这些细胞不能进行传代。
培养皿：PLL包被的培养板（6 well、12 well或24 well plate）。
培养基：HCGC用提供的NM完全培养基（包含基础培养基，1% NGS和1%P/S）培养。
操作步骤：
1) 包被多聚-L-赖氨酸（2 μg/cm2）培养板的准备（如6 孔板）：6孔板的一个孔加入2 mL无菌水和20 μL PLL原液，轻轻吹匀后将培养瓶放置在37°C的孵育箱中过夜（或至少1小时）。
2) 完全培养基的准备：将添加物按比例加入到基础培养基中。
3) 将解冻后的HN吸至配好的适当的完全培养基中（3 mL/孔），轻轻翻转试管1-2次，以获得培养基中的均质细胞悬浮液（不建议通过上下吹打来重悬原代神经元）。
4) 将细胞悬液按3 mL/孔的量加入至6孔板中，十字交叉法轻柔摇晃培养瓶使细胞分布均匀，将培养瓶放入细胞培养箱中。（注：不建议在解冻后稀释和离心细胞，因为这些操作对细胞的伤害比培养中残留的二甲基亚砜（DMSO）的影响更大。同时，将细胞置于PLL涂层培养有助于促进细胞附着。）
换液：为了获得最佳结果，在细胞培养开始后至少16小时内不要干扰培养。第二天更换培养基，以去除残留的二甲基亚砜（DMSO）和未附着的细胞，之后每隔一天更换培养基。细胞可能需要几天的时间才能在培养物中生长出神经突起。
生长条件：在CO2浓度为5%，温度为37℃，相对湿度（RH）为95%的细胞培养箱中培养。
表1 HCGC培养材料
参考文献
[1] Hatten ME. (1999) “Central nervous system neuronal migration.” Annu Rev Neurosci. 22: 511-39.
[2] Andersen BB, Korbo L, Pakkenberg B. (1992) “A quantitative study of the human cerebellum with unbiased stereological techniques.” J Comp Neurol. 326: 549-60.
[3] Monti B, Marri L, Contestabile A. (2002) “NMDA receptor-dependent CREB activation in survival of cerebellar granule cells during in vivo and in vitro development.” Eur J Neurosci. 16: 1490-8.
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