【Lonza】人脐静脉内皮细胞（HUVEC）产品使用攻略

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HUVEC 人脐静脉内皮细胞细胞产品人原代细胞 Human Primary cells 人脐带细胞系统 Human Umbilical Cord Cell System Lonza Umbilical Vein Endothelial Cells Endothelial cell Basal medium CC-3162 CC-3156

小白求助前辈指路

人脐静脉内皮细胞培养不成功、实验做不出来怎么办？新手小白迫切求助，希望各位前辈在文章下方留言，分享自己的经验，为小白们答疑解惑！

人脐静脉内皮细胞

（HUVEC）

血管内皮细胞对于维持血管内环境平衡起着重要作用。血管内皮细胞产生和分泌凝血和纤溶系统的激活剂和抑制剂，释放调节细胞增殖和控制血管壁张力的分子，并介导血小板的粘附和聚集。由于易于获取和纯度高，人脐静脉内皮细胞（HUVECs）是研究内皮细胞生理学、血管生成和药物发现的最受欢迎的内皮细胞。HUVECs具有“鹅卵石”形态，细胞生长为单层紧密相对的多边形大细胞，含有原位内皮细胞特征的细胞质包涵体（Weibel-Palade小体）以及大量的平滑肌肌动蛋白，vWF/Factor VIII和CD-31特异性抗体免疫荧光染色呈阳性，并具有摄取乙酰化低密度脂蛋白的能力。培养的HUVECs内皮细胞也含有与组织供者血型相适应的ABH抗原，但在培养的平滑肌细胞或成纤维细胞上未检测到这些抗原。

培养条件

培养基：用Clonetics™ EGM™-2 BulletKit™提供的完全培养基（包含基础培养基及FBS在内的补充物）培养。

操作步骤：

将解冻后的HUVEC细胞按1:10的比例加入到预热的基础培养基中，轻柔混匀，室温210×g离心5 min。去除上清，用EGM™-2完全培养基对细胞沉淀轻柔重悬后，加入到适当的培养容器中并置于细胞培养箱中进行培养。

换液：培养开始后16小时内不要干扰培养。之后每三天更换一次培养基。

传代：当细胞密度达到70%-90%时进行传代。

1) 将T/E、HEPES、TNS和培养基提前置于室温平衡（不建议37℃加热）。

2) 弃除旧培养基，并用HEPES清洗细胞后吸除加入适量T/E进行消化，一段时间后镜下观察，待细胞完全变圆、脱落，轻轻拍打底部和侧面，加入2倍T/E体积的TNS进行终止消化，将细胞悬液转移至15 mL离心管中，室温210×g离心5 min，用新培养基重悬细胞沉淀后计数，根据2,500-5,000 cells/cm²的密度传代。

生长条件：在CO₂浓度为5%，温度为37℃，相对湿度（RH）为95%的细胞培养箱中培养。

表 1 HUVEC培养材料

参考文献

[1] DeCicco-Skinner, K. L., et al. (2014). "Endothelial cell tube formation assay for the in vitro study of angiogenesis." J Vis Exp(91): e51312.

[2] Ganguly, A., et al. (2012). "Isolation of human umbilical vein endothelial cells and their use in the study of neutrophil transmigration under flow conditions." J Vis Exp(66): e4032.

[3] Morgan DMLML. (1996) “Isolation and culture of human umbilical vein endothelial cells.” In Jones GE, Human Cell Culture Protocols (pp 104-109) Totowa: Humana Press.

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