【ScienCell】人肝巨噬细胞（ HHMa）产品使用攻略

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小白求助前辈指路

人肝巨噬细胞培养不成功、实验做不出来怎么办？新手小白迫切求助，希望各位前辈在文章下方留言，分享自己的经验，为小白们答疑解惑！

人肝巨噬细胞

（ HHMa）

巨噬细胞是由循环的骨髓来源的单核细胞分化而来的细胞。巨噬细胞的主要功能是清除细胞垃圾和破坏入侵的病原体。人肝巨噬细胞（HHMa），也被称为Kupffer细胞，位于肝窦内腔。HHMa通过对病原体和转移细胞的响应来保护肝脏，同时允许容忍通过门静脉和动脉的血流输入的中无害自身和外来抗原的输入。研究表明，肝巨噬细胞在纤维化、肝炎、脂肪肝和肝移植中发挥重要作用。HHMa是研究正常生理和病理条件下巨噬细胞功能的优秀优秀模型。

培养方式

培养瓶：PLL（多聚-L-赖氨酸）包被的培养瓶。

培养基：HHMa用所提供的MaM完全培养基（含5%FBS，1% MaGS和1%P/S）培养。

操作步骤：

1) 包被PLL（2 μg/cm²）涂层的6孔细胞培养板的准备：向6孔板的一个孔中加入2mL无菌水，然后加入20 μL PLL原液，轻柔混匀；对其他孔重复此步骤。将培养板放置在37℃的孵育箱中过夜（或至少一小时）。

2) 准备MaM完全培养基：将MaGS、FBS和P/S溶液在37℃下解冻后轻轻倾斜试管多次，确保内容物完全混合后加入培养基中，并充分混合。

3) 完全培养基轻柔重悬解冻后的细胞，无菌水清洗PLL涂层培养板两次，将细胞悬液加入到包被的培养板中，完全培养基3 mL/每孔，细胞密度为1-2 x 10⁴cells/cm²。

换液：培养开始后至少16小时内不要干扰培养。第二天，更换培养基以去除残留的二甲基亚砜和未附着的细胞。一旦巨噬细胞附着，即可用于实验。（注：在解冻HHMa细胞之前，实验应该进行良好的组织。建议在细胞解冻后尽快将其用于实验。由于HHMa细胞无法，因此不能进行细胞培养或传代。）

生长条件：在CO₂浓度为5%，温度为37℃，相对湿度（RH）为95%的细胞培养箱中培养。

表 1 HHMa 培养材料

参考文献

[1] Liaskou E, Wilson DV, Oo YH. (2012) “Innate immune cells in liver inflammation.” Mediators Inflamm. 2012:949157.

[2] Bieghs V, Verheyen F, van Gorp PJ, Hendrikx T, Wouters K, Lütjohann D, Gijbels MJ, Febbraio M, Binder CJ, Hofker MH, Shiri-Sverdlov R. (2012) “Internalization of modified lipids by CD36 and SR-A leads to hepatic inflammation and lysosomal cholesterol storage in Kupffer cells.” PLoS One. 7: e34378.

[3] Tian Y, Jochum W, Georgiev P, Moritz W, Graf R, Clavien PA. (2006) “Kupffer cell-dependent TNF-alpha signaling mediates injury in the arterialized small-for-size liver transplantation in the mouse.” Proc Natl Acad Sci USA. 103: 4598-603.

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