【Cytiva】Ficoll 密度梯度离心液常见问题及解决方案
常见问题及解决方案
一、Ficoll 分离人外周血单个核细胞，血小板污染较多，如何改善？
（1）不管用哪种离心管，都需要严格保持样品的高度/ficoll 的高度比为 3/2.4；
（2）离心温度应控制在 18～20 ℃；
（3）取目的层样品时，需先将上层溶液去掉，再吸取目的层；
（4）增加分离后的洗涤步骤；
（5）分离后洗涤时，可以在较低的离心力情况下（比如 200 g）进行离心处理，血小板密度比较低，会留在血浆中，PBMC在沉淀里，通过这一操作可以除掉一部分血小板；
（6） 考虑起始血液样品本身是否正常、是否新鲜。
二、Ficoll-Paque PLUS 分离人外周血中的淋巴细胞，淋巴细胞产量低、活力低且出现其它类型细胞污染，原因是什么？
多半是由于样品含有非正常密度的细胞。这些细胞的密度不同于那些来自正常人血液中细胞的密度，比如非正常血液样品、非人血液样品，或非外周血来源的样品。在这些情景下，Percoll可能比 Ficoll-Paque PLUS更加适合此类样本的分离。
三、Ficoll分离人外周血中的淋巴细胞，为何淋巴细胞产量低但活力正常 ？
在分离时，未用平衡盐溶液将血液稀释到 1:1；通常情况下，红细胞比容较高，高细胞密度导致大量的淋巴细胞陷入红细胞团块中，此时应进一步稀释血液样品。
四、Ficoll 分离人外周血中的淋巴细胞，为何淋巴细胞低产量且粒细胞污染增加？
可能是由于离心机转子振动，导致梯度混合。离心机转子振动可能导致淋巴细胞带的增宽，与下层细胞混合。应先检查转子是否已平衡，再选择合适的转速，以避免自发共振频率。
五、Ficoll分离得到的淋巴细胞中有较多的红细胞污染，原因是什么？
①离心机温度太低可能导致这样的情况发生。Ficoll-Paque是一种密度梯度离心介质。在低温条件下，Ficoll-Paque的密度较高，因而红细胞的聚集效果比较差，离心时红细胞和粒细胞不能很好地穿透 Ficoll-Paque 层而造成分离后的淋巴细胞有红细胞污染。合适的分离温度应保持在 18～20 ℃。
②可能离心速度太慢和/或离心时间太短。必须采用适当的时间和离心力，以确保非淋巴细胞完全沉淀。
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