【PromoCell】PromoCell细胞相关问题及解答（一）

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PromoCell HUVEC C-12203 C-12006 NHEK C-12018

1.“正常人类细胞”的定义是什么？

“正常”意味着所讨论的细胞是从非肿瘤组织中新鲜分离提取得到的。它们在体外具有有限的寿命，这些细胞的基因没有被修改。“正常”细胞是初级细胞，至少经过一次次级培养。

2.“种群倍增”（PD）和“传代”之间的区别是什么？

种群倍增（PD）是体外培养过程中细胞总数的两倍增加。在特定时点计算培养物进行了多少个PD可以准确衡量其年龄。相比之下，传代一词仅指细胞次级培养的过程，即将细胞从培养容器中分离（使用例如Trpsin/EDTA或Accutase）并以较低的密度重新培养，以促进进一步的细胞生长。传代这个术语不考虑可以应用的不同分裂比例。不同的分裂比例会产生具有相同传代次数但不同倍增次数的培养物。因此，传代只是对培养物实际年龄的粗略估计。

3.PromoCell细胞是从单个供体中获得的，还是来自多个供体的混合细胞？

除非另有说明，PromoCell的人类细胞是从单个供体中获取的。供体的年龄、性别和种族在特定批次的分析证书中已表明，可在官方网站相应产品处下载。对于一些特定的细胞类型，PromoCell也提供来自多个供体的细胞，包括HUVEC混合（＃C-12203/C-12253）、HUVEC 2混合（＃C-12208/C-12209）、NHEK混合（＃C-12005/C-12007；C-12006/C-12008）和NHEK GM3混合（＃C-12015/C-12017；C-12016/C-12018）

4.Promocell产品中SupplementMix和SupplementPack的区别?

PromoCell SupplementMix中所有的添加物均提前预混到一个管中。而SupplementPack中所有的添加物均独立分管包装。

5.PromoCell培养人的原代细胞的生长培养基能否用来培养其他物种的原代细胞？

PromoCell人原代细胞的生长培养基是针对人类细胞的体外培养进行优化的。在大多数情况下，它们也可以用于其他几种物种（例如大鼠、小鼠、牛、猪细胞）。具体要查看PromoCell培养基在其他物种/细胞类型中使用的参考文献列表（扫描下方二维码进行查看）

6.添加补充剂后的Promocell培养基能用多久？

一旦您将补充剂添加到基础培养基中，在4°C下保存，其保存期限为6周（有少数例外）。完全培养基的稳定性也在相应的产品使用手册中指定（“存储和稳定性”）。请避免将培养基反复加热至37°C，因为这会降低生长因子的活性和L-谷氨酰胺的浓度。

7.Promocell补充剂和基础培养基的保质期是多久？

Promocell大部分基础培养基的保质期从生产日期开始为9个月（在4°C-8°C之间储存）。补充剂的保质期从生产日期开始为12个月（在-20°C下储存）。产品标签上会明确标注到期日期。

8.PromoCell的正常人类细胞的特征性Marker是什么？

关于PromoCell的正常人类细胞的特征标记，详细信息请参阅每种细胞类型的使用手册或查看分析证书（每批次都可在线下载）。

9.Promocell正常人类细胞推荐的分裂比例是多少？

PromoCell不建议使用特定的分裂比例来处理正常人类细胞，因为细胞产量因实验室而异。建议在胰蛋白酶处理后对细胞进行计数，并将其推荐的细胞密度重新培养。每种细胞类型的推荐培养密度可以在使用手册中找到。

10.Promocell的冷冻和增殖细胞之间的区别是什么？

Promocell的冷冻保存细胞是在冻存液Cryo-SFM（＃C-29910）中冷冻，并通过干冰运输。送达后，它们必须转移到液氮中，或者可以解冻并直接用推荐的培养基在适当的组织培养容器中进行接种。增殖细胞是在PromoCell解冻并在T25培养瓶中的生长培养物中进行运输。

11.使用PromoCell的正常人类细胞时，应该在第几代进行实验？

关于在使用PromoCell的正常人类细胞进行实验时，应该在第几代进行实验，没有一般性的建议。这取决于细胞类型和实验类型。大多数科学家在使用正常细胞进行实验时不超过第4到第6代，因为细胞在体外培养逐渐改变其表型。如果某种特定表型对您的实验至关重要，您应该定期进行表达控制实验，以确保标记物在您的细胞中仍然充分表达。

12.是否可以加入抗生素来培养PromoCell的正常人类细胞？

为了细胞的最佳生长，PromoCell建议不要使用抗生素。大多数原代或正常人类细胞在抗生素存在的情况下生长速度会降低。某些情况下，如果无法完全确保无菌环境，可建议向培养基中添加抗生素以保护培养物免受潜在的微生物感染。

13.PromoCell是否对其用于细胞分离的每个组织都有知情同意书可用？

是的，PromoCell使用的用于细胞分离的所有组织都来自已签署知情同意书的捐赠者（可以是捐赠者本人、授权代理人或法定代理人）。在获取和使用人体组织时，PromoCell严格遵守《人权与尊严保护公约》、《赫尔辛基宣言》、《人体组织法》和《德国联邦数据保护法》。

14.是否可以将冷冻保存的细胞存储在-80°C？

将细胞存储在-80°C不足以长期保存原代细胞，并会导致不可逆的细胞损伤。请将其存储在液氮中（<-150°C）。

15.PromoCell正常人类细胞的培养条件是什么？

PromoCell正常人类细胞应在37°C和5% CO₂的细胞培养箱中培养。请注意：如果使用无过滤帽的细胞培养瓶，将帽子旋转半圈以提供足够的通风。

16.PromoCell“即用型”培养基和PromoCell培养基套装有什么区别？

PromoCell细胞培养基“即用型”由基础培养基和SupplementMix组成。PromoCell培养基套装由基础培养基和SupplementPack组成。将适当的补充剂（SupplementMix或SupplementPack）加入到相应的基础培养基中将得到相同的生长培养基。详细信息请扫描下方二维码查看(promocell.com)。

17.应在哪里下载细胞的分析证书（Certificate of Analysis）？

您可以扫描上方二维码打开网址，在这里下载分析证书（CoAs）Certificates of Analysis - PromoCell只需输入批号并点击搜索。

18.解冻和传代PromoCell原代细胞时应注意什么？

请按照相应的细胞手册中包含的方案进行操作。要了解有关原代细胞培养的最佳实践，请扫描下方二维码，查看PromoCell_Best-Practices-in-Cell-Culture.pdf

19.如果使用相同的单核细胞开始培养，使用M2巨噬细胞生成培养基相对于M1巨噬细胞生成培养基培养的细胞量较低的原因可能是什么？

对于M2巨噬细胞生成培养基，非常重要的是加入细胞因子后的放置时间不超过2周；否则细胞产量会迅速下降。最好尽可能使用M2新鲜培养基，以避免M1和M2产量之间的差异。

20.PromoCell可以推荐一种适合共培养内皮细胞和成纤维细胞的培养基吗？

客户在共培养人类冠状动脉内皮细胞（HCAEC; C-12221）和正常人皮肤成纤维细胞（NHDF; C-12300）时，成功使用了PromoCell内皮细胞生长培养基MV2（C-22022）。

21.使用PromoCell DC Generation Medium XF进行树突状细胞生成有哪些优势？

PromoCell的DC Generation Medium XF（C-28052）采用无异物质的配方。它提供了一个完整的培养基系统（即用型，包含所有细胞因子），并且能够有效且可重复地在体外将新鲜分离的外周血单核细胞（moDCs）进行成熟分化为树突状细胞。

22.PromoCell如何确保周细胞中没有成纤维细胞的污染？成纤维细胞是否通过使用标记了抗CD90的磁珠进行分离而被去除？

PromoCell不使用CD90免疫磁珠对周细胞进行分离，而是通过以下方式排除成纤维细胞的污染：

1）在细胞分离后的短时间内，可以检测到周细胞培养中是否存在成纤维细胞。周细胞需要经过最多2周的时间才开始增殖，而成纤维细胞则会立即开始增殖并覆盖整个培养物。

2）质量控制期间对分离的周细胞进行表征，包括对CD146的流式细胞术分析。周细胞表达CD146，而胎盘成纤维细胞则不表达CD146。

23.细胞在细胞传代过程中没有脱落。可能的原因是什么？

请查看图1故障排除指南，以确定细胞在细胞传代过程中脱落不良的可能原因。

图 1 传代相关问题应对方案

24.为什么从PromoCell的内皮细胞生长培养基MV Kit（C-22120）中去除氢化可的松，HDMEC的生长速率会显著降低？

据报道，表皮生长因子（EGF）和氢化可的松对微血管内皮细胞的生长具有协同作用。因此，如果您去除氢化可的松，HDMEC的增殖明显受到影响。

25.在使用Trypsin之前，是否该加热？

建议将Trypsin以及其他脱离细胞的溶液使用前平衡至室温，并在消化时避免过度消化，造成不可逆的细胞损伤。

26.DetachKit（C-41200）和DetachKit-2（C-41202）之间有什么区别？

这两个试剂盒都包含HepesBSS、Trypsin/EDTA和Trypsin中和溶液（TNS）。在DetachKit（C-41200）中，Trypsin/EDTA的浓度为0.04%/0.03%。在DetachKit-2（C-41202）中，Trypsin/EDTA的浓度降低到0.025%胰蛋白酶/0.01% EDTA。HepesBSS和TNS的浓度在两个试剂盒中是相同的。

27.PromoCell如何对MSC-AT（C-12977）进行表征的？

PromoCell的hMSC-AT通过其向软骨细胞、脂肪细胞和骨细胞的分化潜能进行表征。此外，通过流式细胞术检测CD73、CD90和CD105的表达情况，并根据国际细胞治疗学会的建议，确定CD14、CD19、CD34、CD45和HLA-DR的表达情况。

28.在培养PromoCell正常人细胞时，我需要使用包被涂层的细胞培养器皿吗？

对于大多数PromoCell的正常人细胞来说，并不需要使用包被涂层的细胞培养器皿，但也可以选择这样做。由于细胞外基质蛋白包被的涂层可能会影响细胞代谢，建议在一套完整的实验中使用相同的包被涂层的材a 料。以下细胞的培养需要在涂层包被的培养器皿中生长：

①间充质干细胞（C-12974/C-12971/C-12977）在PromoCell MSC Growth Medium XF（C-28019）中培养并在MSC Neurogenic（C-28015）、Adipogenic（C-28016）或Osteogenic（C-28013）分化培养基中分化时，需要纤连蛋白涂层；

②人单核细胞衍生巨噬细胞（C-12914/C-12916/C-12915/C-12917）必须在纤连蛋白包被涂层的培养器皿中与PromoCell的M1-和M2-Generation Media XF（C-28055，C-28056）结合使用；

③为使用PromoCell的成骨细胞矿化培养基（C-27020）对成骨细胞有效进行诱导矿化，培养器皿应预先用胶原I型涂层包被。

29.PromoCell在哪一步骤测试细胞特异性标记物？

通常在解冻后培养的第一代细胞中确定细胞特异性标记物。例如：解冻后，HUVEC处于P1阶段。在P2阶段测试标记物（CD31表达，Dil-Ac-LDL摄取）。注意：直接在分离后冷冻的细胞（血液细胞）在解冻后立即进行测试，没有进一步的培养步骤。

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