【ScienCell】人淋巴成纤维细胞（HLF）产品使用攻略
人淋巴成纤维细胞培养不成功、实验做不出来怎么办？新手小白迫切求助，希望各位前辈在文章下方留言，分享自己的经验，为小白们答疑解惑！
人淋巴成纤维细胞
（HLF）
成纤维细胞是起源于胚胎中胚层的间充质细胞，广泛用于各种细胞和分子研究，适用于从基因转染到微注射等各种操作。成纤维细胞分泌富含I型和/或III型胶原的非刚性细胞外基质。研究表明，不同器官中的成纤维细胞具有异质性。在淋巴组织中，成纤维细胞构建了一个独特导管系统，其在调节免疫应答和组织液体稳态方面起着基础性的作用。
培养方式
培养瓶：PLL（多聚-L-赖氨酸）包被的培养瓶。
培养基：HLF用提供的FM完全培养基（包含基础培养基、2% FBS、1% FGS和1% P/S）培养。
操作步骤：
1) 包被PLL（2 μg/cm2）培养瓶（T-75培养瓶）的准备：将10 mL无菌水加入到T-75培养瓶中，加入15 μL PLL原液，轻轻吹匀后将培养瓶放置在37°C的孵育箱中过夜（或至少1小时）。
2) 无菌水清洗包被PLL的T-75 2次，加入20 mL FM完全培养基（基础培养基、FBS、FGS和P/S按比例混合配制），将解冻后的HLF加入至包被的T-75中（推荐细胞密度为5000 cells/cm2），十字交叉法轻柔摇晃培养瓶使细胞分布均匀，将培养瓶放入细胞培养箱中。（注：不建议在解冻后稀释和离心细胞，因为这些操作对细胞的伤害比培养中残留的二甲基亚砜（DMSO）的影响更大。同时，细胞在PLL包被培养瓶中有助于促进细胞附着。）
换液：为了获得最佳结果，在培养开始后至少16小时内不要干扰培养。第二天更换培养基，以去除残留的二甲基亚砜和未附着的细胞，之后每隔三天更换一次培养基，直到培养达到约70%的密度，一旦培养达到约70%的密度，每隔一天更换一次培养基，直到培养达到约90%的密度。
传代：当细胞密度达到90%时进行传代。
1) 将T/E、包被培养瓶、DPBS、培养基提前置于室温平衡（不建议37℃加热）。
2) 弃除旧培养基，并用DPBS清洗细胞后吸除加入5 mL DPBS和5 mL 0.05% T/E solution 轻柔晃动培养瓶后放入37℃培养箱（注：原代细胞传代时请勿使用未稀释的胰蛋白酶），一段时间后镜下观察，待细胞完全变圆、脱落，轻轻拍打底部和侧面，加入2 mL FBS终止消化，将细胞悬液转移至15 mL离心管中，1000 rpm离心5 min，用新培养基重悬细胞沉淀后计数，根据5000 cells/cm2的密度传代至预先用PLL包被的培养瓶中。
生长条件：在CO2浓度为5%，温度为37℃，相对湿度（RH）为95%的细胞培养箱中培养。
表 1 HLF 培养材料
参考文献
[1] Gabbiani G, Rungger-Brandle E. (1981) “The fibroblast.” In Glynn LE, Handbook of Inflammation, Vol. 3: Tissue Repair and Regeneration (pp 1-50). Amsterdam: Elsevier.
[2] Roozendaal R, Mebius RE, Kraal G. (2008) “The conduit system of the lymph node.” Int Immunol. 20: 1483-7.
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