【Cellntec】原代人间充质干细胞(MSCs)的扩增
【Cellntec】原代人间充质干细胞(MSCs)的扩增
原代人间充质干细胞扩增不成功、实验做不出来怎么办?新手小白迫切求助,希望各位前辈在文章下方留言,分享自己的经验,为小白们答疑解惑!
原代人间充质干细胞的扩增
(MSCs)
1.在常规扩增过程中(分化之前),直到第4代前,通常可以获得可重复的分化效果。
2.培养基的准备:将所需的CnT MSC扩增培养基加入将扩增MSC的培养瓶中,放入细胞培养箱中平衡至少30 min。
3.在37°C的水浴中轻轻摇晃装有MSC的冻存管,直到刚刚融化。冻存管必须迅速解冻,同时确保瓶内细胞的温度不超过4°C(在小块晶体仍存在时,将冻存管从水浴中取出)。
4.用移液管上下吸取细胞,将其转移到平衡后的细胞培养容器中。DMSO的含量必须稀释到小于1%。
5.每个培养容器中接种的细胞悬浮液体积应至少达到所选增殖培养基的推荐接种密度(2,000 cells/cm2)。在接种后6~24 h内更换培养基,以去除残留的DMSO。
6.以每周更换3次培养基的方式扩增细胞,直到达到所需的细胞数。为了获得最佳的扩增和分化效果,培养应在没有G/A的情况下进行。
表 1 MSCs扩增培养材料
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