【ScienCell】人前列腺上皮细胞（HPrEpiC）产品使用攻略

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小白求助前辈指路

人前列腺上皮细胞培养不成功、实验做不出来怎么办？新手小白迫切求助，希望各位前辈在文章下方留言，分享自己的经验，为小白们答疑解惑！

人前列腺上皮细胞

（HPrEpiC）

前列腺是雄性哺乳动物生殖系统的重要附属器官，其结构和功能活动受雄激素的调控。前列腺由三个区域组成，可以通过细胞角蛋白表达谱来进行鉴定。基底细胞主要表达高分子量的细胞角蛋白（CK5和CK14），腺管分泌细胞主要表达低分子量的细胞角蛋白（CK8和CK18），而中间细胞则同时表达基底和腺管细胞的细胞角蛋白。此外，研究表明基底上皮细胞会分化为腺管上皮细胞。前列腺癌是影响男性最常见的癌症之一，具有较高的发病率和死亡率。HPrEpiC培养为研究前列腺的许多重要特征以及化学和激素致癌过程提供有用工具。

HPrEpiC分离自人前列腺组织，可通过cytokeratin-18和cytokeratin-19的特异性免疫荧光染色进行鉴定。

培养方式

培养瓶：PLL（多聚-L-赖氨酸）包被培养瓶。

培养基：HPrEpiC用提供的PEpiCM完全培养基（包含基础培养基、1% PEpiCGS和1% P/S）。

操作步骤

1) 包被PLL（2 μg/cm²）培养瓶（T-75培养瓶）的准备：将10 mL无菌水加入到T-75培养瓶中，加入15 μL 瓶、PLL原液，轻轻吹匀后将培养瓶放置在37°C的孵育箱中过夜（或至少1小时）。

2) 无菌水清洗包被PLL的T-75 2次，加入20 mL PEpiCM完全培养基（基础培养基、PEpiCGS和P/S按比例混合配制），将解冻后的HPrEpiC加入至包被的T-75中，十字交叉法轻柔摇晃培养瓶使细胞分布均匀，将培养瓶放入细胞培养箱中。（注：不建议在解冻后稀释和离心细胞，因为这些操作对细胞的伤害比培养中残留的二甲基亚砜（DMSO）的影响更大。同时，将细胞置于PLL涂层培养有助于促进细胞附着。）

换液：为了获得最佳结果，在培养开始后至少16小时内不要干扰培养。第二天更换培养基，以去除残留的二甲基亚砜和未附着的细胞，之后每隔三天更换一次培养基，直到培养达到约70%的密度，一旦培养达到约70%的密度，每隔一天更换一次培养基，直到培养达到约90%的密度。

传代：当细胞密度达到90%时进行传代。

1) 将T/E、DPBS、培养基提前置于室温平衡（不建议37℃加热）。

2) 弃除旧培养基，并用DPBS清洗细胞后吸除，加入10 mL 0.05% T/E solution 轻柔晃动培养瓶后放入37℃培养箱，一段时间后镜下观察，待细胞完全变圆、脱落，轻轻拍打底部和侧面，加入5 mL FBS（#0500）终止消化，将细胞悬液转移至50 mL离心管中，1000 rpm离心5 min，用新培养基重悬细胞沉淀后计数，根据5000 cells/cm²的密度传代至预先用PLL包被的培养瓶中。

生长条件

在CO₂浓度为5%，温度为37℃，相对湿度（RH）为95%的细胞培养箱中培养。

表 1 HPrEpiC培养材料

参考文献

[1] van Leenders G, Dijkman H, Hulsbergen-van de Kaa C, Ruiter D, Schalken J. (2000) “Demonstration of intermediate cells during human prostate epithelial differentiation in situ and in vitro using triple-staining confocal scanning microscopy.” Lab Invest. 80:1251–1258.

[2] Sherwood ER, Berg LA, Mitchell NJ, McNeal JE, Kozlowski JM, Lee C. (1990) “Differential cytokeratin expression in normal, hyperplastic and malignant epithelial cells from human prostate.” J. Urol. 143:167–171.

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