【ScienCell】人睾丸索氏细胞（HSerC）产品使用攻略

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人原代细胞 Human Primary cells 男性生殖细胞系统 Male Reproductive Cell System Sciencell 人睾丸索氏细胞 Sertoli Cells Sertoli Cell Medium 4521

小白求助前辈指路

人睾丸索氏细胞培养不成功、实验做不出来怎么办？新手小白迫切求助，希望各位前辈在文章下方留言，分享自己的经验，为小白们答疑解惑！

人睾丸索氏细胞

（HSerC）

索氏细胞（SerC）对睾丸的发育、精子产生和血-睾丸屏障的形成至关重要。索氏细胞限制激素和营养物质等到精小管的腔面区域。除了形成血-睾丸屏障外，索氏细胞还为精小管提供主要的结构支持，并保护生精细胞免受免疫系统的攻击。异常的索氏细胞增殖可导致男性生殖障碍，如睾丸生殖细胞癌、隐睾、尿道下裂和精子计数过低。索氏细胞的增殖在一定程度上受到卵泡刺激素（FSH）和甲状腺激素（TH）的调控，其中FSH促进增殖，TH促进更为静止的状态。HSerC的培养可应用于研究睾丸发育异常综合征和开发男性生殖障碍治疗方法。

HSerC分离自人睾丸，可通过GATA-4和Sox-9的特异性抗体免疫荧光染色进行鉴定。

培养方式

培养瓶：PLL（多聚-L-赖氨酸）包被培养瓶。

培养基：HSerC用提供的PEpiCM完全培养基（包含基础培养基、5% FBS、1% SerCGS和1% P/S）。

操作步骤：

1) 包被PLL（2 μg/cm²）培养瓶（T-75培养瓶）的准备：将10 mL无菌水加入到T-75培养瓶中，加入15 μL 瓶、PLL原液，轻轻吹匀后将培养瓶放置在37°C的孵育箱中过夜（或至少1小时）。

2) 无菌水清洗包被PLL的T-75 2次，加入20 mL PEpiCM完全培养基（基础培养基、PEpiCGS和P/S按比例混合配制），将解冻后的HSerC加入至包被的T-75中，十字交叉法轻柔摇晃培养瓶使细胞分布均匀，将培养瓶放入细胞培养箱中。（注：不建议在解冻后稀释和离心细胞，因为这些操作对细胞的伤害比培养中残留的二甲基亚砜（DMSO）的影响更大。同时，将细胞置于PLL涂层培养有助于促进细胞附着。）

换液：为了获得最佳结果，在培养开始后至少16小时内不要干扰培养。第二天更换培养基，以去除残留的二甲基亚砜和未附着的细胞，之后每隔三天更换一次培养基，直到培养达到约70%的密度，一旦培养达到约70%的密度，每隔一天更换一次培养基，直到培养达到约90%的密度。

传代：当细胞密度达到95%时进行传代。

1) 将T/E、DPBS、培养基提前置于室温平衡（不建议37℃加热）。

2) 弃除旧培养基，并用DPBS清洗细胞后吸除，加入10 mL 0.05% T/E solution 轻柔晃动培养瓶后放入37℃培养箱，一段时间后镜下观察，待细胞完全变圆、脱落，轻轻拍打底部和侧面，加入5 mL FBS（#0500）终止消化，将细胞悬液转移至50 mL离心管中，1000 rpm离心5 min，用新培养基重悬细胞沉淀后计数，根据5000 cells/cm²的密度传代至预先用PLL包被的培养瓶中。

生长条件：在CO₂浓度为5%，温度为37℃，相对湿度（RH）为95%的细胞培养箱中培养。

表 1 HSerC培养材料

参考文献

[1] Griswold M. (1998) “The central role of Sertoli cells in spermatogenesis.” Semin Cell Dev Biol. 9(4): 411-416.

[2] Franca L, Hess R, Dufour J, Hofmann M, Giswold M. (2016) “The Sertoli cell: one hundred fifty years of beauty and plasticity.” Andrology. 4(2):189-212.

[3] Sharpe R, McKinnell C, Kivlin C, Fisher J. (2003) “Proliferation and functional maturation of Sertoli cells, and their relevance to disorders of testis function in adulthood.” Reproduction. 125: 769-784.

[4] Tarulli G, Stanton P, Meachem S. (2012) “Is the adult Sertoli cell terminally differentiated? Biol Reprod. 87(1): 1-11.

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