【ScienCell】人毛发生发基质细胞（HHGMC）产品使用攻略

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人原代细胞 Human Primary cells 毛发细胞系统 Hair Cell System Sciencell 人毛发生发基质细胞 Hair Germinal Matrix Cells Mesenchymal Stem Cell Medium

小白求助前辈指路

人毛发生发基质细胞培养不成功、实验做不出来怎么办？新手小白迫切求助，希望各位前辈在文章下方留言，分享自己的经验，为小白们答疑解惑！

人毛发生发基质细胞

（HHGMC）

生发基质是毛球基部毛乳头周围的一个区域，该区域包含一群过渡扩增基质细胞，是毛发生长和色素沉着发生部位。在活跃的毛发生长阶段，生发基质细胞迅速增殖并分化为所有毛囊层的细胞谱系，使毛发生长。角角质化是指中间丝蛋白复合物和角质相关蛋白基质的终末分化，使毛发锚定在毛囊中。毛囊细胞具有免疫特权，并且植入的真皮乳头细胞的生发基质具有诱导新毛囊形成的能力，这表明使用毛囊细胞植入可能治疗脱发。

HHGMC分离自人头皮组织，间充质细胞形态，可通过fibronectin和CD105特异性抗体的免疫荧光进行鉴定。

培养方式

培养瓶：纤连蛋白（Bovine Plasma Fibronectin, 2 µg/cm²）包被培养瓶。

培养基：HHGMC在所提供的MSCM完全培养基（含基础培养基，5% FBS、1% MSCGS、1% P/S）中培养。

操作步骤

1) 包被纤连蛋白（2 µg/cm²）培养瓶的准备（T-75培养瓶）：将10 mL无菌的Dulbecco's磷酸盐缓冲盐（DPBS）与150 µL纤连蛋白原液混匀后加入到T-75培养瓶中，将培养瓶放置在37°C的孵育箱中过夜（或至少2小时）。在铺细胞前将未凝固纤连蛋白溶液吸出（可重复使用2次），加入20 mL完全培养基（T-75培养瓶）。

2) MSCM完全培养基的配制：用移液管将恢复至室温的FBS（#0025）、MSCGS补充剂轻轻摇晃后全部转移到基础培养基中，并用培养基清洗补充管以恢复整个体积，然后摇晃以混匀完全培养基。

3) 吸出未凝固的纤连蛋白溶液，T-75中加入20 mL的完全培养基，将解冻后的细胞小心加入到培养基中，十字交叉法轻柔平晃培养瓶。（注：不建议在解冻后对细胞进行稀释和离心，因为这些与培养物中残留DMSO的作用相比，这些作用对细胞的损伤更大；将HHGMC置于纤连蛋白包被的培养瓶中，促进生长同样重要。）

换液：培养开始后16小时内不要干扰培养。次日更换培养液，去除残留的DMSO和未贴壁细胞。之后每三天更换一次培养基，直到培养达到大约70%的密度。一旦培养达到大约70%的密度，每隔一天更换一次培养基，直到培养达到大约90%的密度。

传代：当细胞密度达到90%时进行传代。

1) 将T/E、包被培养瓶、DPBS、培养基提前置于室温平衡（不建议37℃加热）。

2) 弃除旧培养基，并用DPBS清洗细胞后吸除加入5 mL DPBS和5 mL 0.05% T/E solution 轻柔晃动培养瓶后放入37℃培养箱（注：原代细胞传代时请勿使用未稀释的胰蛋白酶），一段时间后镜下观察，待细胞完全变圆、脱落，轻轻拍打底部和侧面，加入2 mL FBS，将细胞悬液转移至15 mL离心管中，1000 rpm离心5 min，用新培养基重悬细胞沉淀后计数，根据5000 cells/cm²的密度传代至预先用纤连蛋白包被的培养瓶中。

生长条件

在CO₂浓度为5%，温度为37℃，相对湿度（RH）为95%的细胞培养箱中培养。

表 1 HHGMC培养材料