【ScienCell】人食管微血管内皮细胞（HEsMEC）产品使用攻略
人食管微血管内皮细胞培养不成功、实验做不出来怎么办？新手小白迫切求助，希望各位前辈在文章下方留言，分享自己的经验，为小白们答疑解惑！
人食管微血管内皮细胞
（HEsMEC）
包裹在微血管系统中的内皮细胞通过其招募循环免疫细胞进入组织和炎症病灶的能力，在炎症过程中起着关键的“看门人”作用。研究表明，人食管微血管内皮细胞（HEsMEC）对LPS、细胞因子和pH暴露表现出强烈的炎症免疫反应，从而在食管炎症中发挥重要的调节作用。在酸性pH条件下，HEsMEC表达某些蛋白，如VCAM-1，而不表达其他蛋白，如ICAM-1。这种表达模式可能在胃食管反流病引发的细胞反应中发挥作用。HEsMEC的培养促进肠道环境对细胞的影响，如LPS、细胞因子和pH暴露下细胞反应，研究表明HEsMEC与下消化道内皮细胞有本质的不同。
HEsMEC分离自人食管组织，其vWF/Factor VIII和CD31 (PECAM1)的特异性抗体免疫荧光染色呈阳性。
培养方式
培养瓶：纤连蛋白（Bovine Plasma Fibronectin, 2 µg/cm2）包被培养瓶。
培养基：HEsMEC用提供的ECM完全培养基培养（包含基础培养基、5% FBS、1% ECGS和1% P/S）。
操作步骤
1) 包被纤连蛋白（2 µg/cm2）的培养瓶的准备（T-75培养瓶）：将5 mL无菌的Dulbecco's磷酸盐缓冲盐（DPBS）与150 µL纤连蛋白原液混匀后加入到T-75培养瓶中，将培养瓶放置在37°C的孵育箱中过夜（或至少2小时）。在铺细胞前将未凝固纤连蛋白溶液吸出（可重复使用2次），加入20 mL ECM完全培养基培养（基础培养基、FBS、ECGS和P/S按比例混合配制）。
2) 将解冻后的细胞加入至T-75中，十字交叉法平晃培养瓶使细胞均匀分布，置于细胞培养箱中培养。
换液：培养开始后至少16小时内不要干扰培养。第二天更换培养基，以去除残留的二甲基亚砜和未附着的细胞，此后每三天更换一次培养基，直到培养物达到大约70%的汇聚度。一旦培养物达到70%的汇聚度，每隔一天更换一次培养基，直到培养物达到大约90%的汇聚度，及时将细胞用于实验。
传代：当细胞密度达到90%时进行传代。
1) 将T/E、包被培养瓶、DPBS、培养基提前置于室温平衡（不建议37℃加热）。
2) 弃除旧培养基，并用DPBS清洗细胞后吸除加入8 mL DPBS和2 mL 0.05% T/E solution 轻柔晃动培养瓶后放入37℃培养箱（注：原代细胞传代时请勿使用未稀释的胰蛋白酶），一段时间后镜下观察，待细胞完全变圆、脱落，轻轻拍打底部和侧面，加入1 mL FBS，将细胞悬液转移至15 mL离心管中，1000 rpm离心5 min，用新培养基重悬细胞沉淀后计数，根据5000-7000 cells/cm2的密度传代至预先用Bovine Plasma Fibronectin包被的培养瓶中。
生长条件
在CO2浓度为5%，温度为37℃，相对湿度（RH）为95%的细胞培养箱中培养。
表 1 HEsMEC培养材料
参考文献
[1] Rafiee P, Ogawa H, Heidemeann J, Li MS, Aslam M, Lamirand TH, Risher PJ, Graewin SJ, Dwinell MB, Johnson CP, Shaker R, Binion DG. (2003) “Isolation and characterization of human esophageal microvascular endothelial cells: mechanisms of inflammatory activation.” Am J Physiol Gastroinest Liver Physiol. 285: G1277-92.
[2] Rafiee P, Theriot ME, Nelson VM, Heidemann J, Kanaa Y, Horowitz SA, Roqaczewski A, Johnson CP, Ali I, Shaker R, Binion DG. (2006) “Human esophageal microvascular endothelial cells respond to acidic pH stree by PI3K/AKT and p38 MAPK-regulated induction of Hsp70 and Hsp27.” Am J Physiol Cell Physiol. 291(5): C931-45.
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