【ScienCell】人肺泡上皮细胞（HPAEpiC）产品使用攻略
人肺泡上皮细胞培养不成功、实验做不出来怎么办？新手小白迫切求助，希望各位前辈在文章下方留言，分享自己的经验，为小白们答疑解惑！
人肺泡上皮细胞
（HPAEpiC）
肺泡上皮细胞（pulmonary alveolar epithelial cells，PAEpiC）由肺泡Ⅰ型和Ⅱ型上皮细胞组成，占肺内表面积的99%以上。I型细胞是指胞质延伸超过内表面积95%的大型鳞状细胞，含有水通道蛋白，并表现出任何哺乳动物细胞类型的最高水渗透性。Ⅱ型细胞，占细胞表面积的2-5%，产生、分泌和回收肺表面活性物质，并含有Na+/K+-ATP酶和阿米洛利敏感的上皮Na+通道。目前公认的假说是，II型细胞通过调节肺中Na+转运来维持肺液体稳态，而I型细胞是“惰性”细胞，仅提供屏障功能，而不具有活性功能。近期研究表明，I型细胞在调节离子和液体运输方面也很重要。HPAEpiC的cytokeratin-18和cytokeratin-19的特异性抗体免疫荧光染色呈阳性。
培养方式
HPAEpiC是非常敏感的细胞，在培养中不增殖。解冻细胞前应组织好实验，尽快用于实验。HPAEpiC不建议进行传代培养，因为这种细胞类型在培养中会发生终末分化。
培养瓶：PLL（多聚-L-赖氨酸）包被的培养瓶。
培养基：HPAEpiC用提供的AepiCM完全培养基（包含基础培养基、2% FBS1、1% EpiCGS和1% P/S）培养。
操作步骤
1) 包被PLL（2 μg/cm2）培养瓶（T-75培养瓶）的准备：将10 mL无菌水加入到T-75培养瓶中，加入15 μL PLL原液，轻轻吹匀后将培养瓶放置在37°C的孵育箱中过夜（或至少1小时）。
2) 无菌水清洗包被PLL的T-75 2次，加入20 mL AepiCM完全培养基（基础培养基、FBS、EpiCGS和P/S按比例混合配制），将解冻后的HPAEpiC加入至包被的T-75中，十字交叉法轻柔摇晃培养瓶使细胞分布均匀，将培养瓶放入细胞培养箱中。（注：不建议在解冻后稀释和离心细胞，因为这些操作对细胞的伤害比培养中残留的二甲基亚砜（DMSO）的影响更大。同时，细胞在PLL包被培养瓶中有助于促进细胞附着。）
换液：为了获得最佳结果，在培养开始后至少16小时内不要干扰培养。第二天更换培养基，以去除残留的二甲基亚砜和未附着的细胞，之后每隔三天更换一次培养基。
表 1 HPAEpiC培养材料
参考文献
[1] Crapo JD, Young SL, Fram EK, Pinkerton KE, Barry BE, Crapo RO. (1983) “Morphometric characteristics of cells in the alveolar region of mammalian lungs.” Am. Rev. Respir. Dis. 128: S42-S46.
[2] Wright JR, Dobbs LG. (1991) “Regulation of pulmonary surfactant secretion and clearance.” Annu. Rev. Physiol.53: 395-414.
[3] Johnson MD, Widdicombe JH, Allen L, Barbry P, Dobbs LG. (2002) “Alveolar epithelial type I cells contain transport proteins and transport sodium, supporting an active role for type I cells in regulation of lung liquid homeostasis.” Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 99(4): 1966-1971.
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