【ScienCell】人小梁网细胞(HTMC）产品使用攻略
人小梁网细胞培养不成功、实验做不出来怎么办？新手小白迫切求助，希望各位前辈在文章下方留言，分享自己的经验，为小白们答疑解惑！
人小梁网细胞
(HTMC）
小梁网位于虹膜根部的周围，具有一个通向Schlemm's管的裂隙开口，将房水引流到静脉血管。小梁网细胞（TMCD）在房水外流中发挥积极作用，且该通路具有眼压依赖性。因此，TMC的损伤或死亡一直与开角型青光眼的发病机制相关。TMC进一步表达神经递质和神经肽的受体，并对极低浓度的多种血管活性肽和生长因子做出反应，使这些细胞能够在多个水平上调节小梁网的通透性。HTMC的培养为研究小梁网的功能控制提供模型，鼓励开发更有效的治疗青光眼的策略。HTMC分离自人眼的并耳管和角巩膜区域，可通过α-smooth muscle actin和fibronectin特异性抗体免疫荧光染色鉴定。
培养方式
培养瓶：PLL（多聚-L-赖氨酸）包被的培养瓶。
培养基：HTMC用提供的TMCM完全培养基（包含基础培养基、2% FBS、1% TMCGS和1% P/S）中培养。
操作步骤：
1) 包被PLL（2 μg/cm2）培养瓶（T-75培养瓶）的准备：将10 mL无菌水加入到T-75培养瓶中，加入15 μL PLL原液，轻轻吹匀后将培养瓶放置在37°C的孵育箱中过夜（或至少1小时）。
2) 无菌水清洗包被PLL的T-75 2次，加入20 mL TMCM完全培养基（基础培养基、FBS、TMCGS和P/S按比例混合配制），将解冻后的HTMC加入至包被的T-75中，十字交叉法轻柔摇晃培养瓶使细胞分布均匀，将培养瓶放入细胞培养箱中。（注：不建议在解冻后稀释和离心细胞，因为这些操作对细胞的伤害比培养中残留的二甲基亚砜（DMSO）的影响更大。同时，将细胞置于PLL涂层培养有助于促进细胞附着。）
换液：为了获得最佳结果，在培养开始后至少16小时内不要干扰培养。第二天更换培养基，以去除残留的二甲基亚砜和未附着的细胞，之后每隔三天更换一次培养基，直到培养达到约70%的密度，一旦培养达到约70%的密度，每隔一天更换一次培养基，直到培养达到约90%的密度。
传代：当细胞密度达到90-95%时进行传代。
1) 将T/E、DPBS、培养基提前置于室温平衡（不建议37℃加热）。
2) 弃除旧培养基，并用DPBS清洗细胞后吸除加入5 mL DPBS和5 mL 0.05% T/E solution 轻柔晃动培养瓶后放入37℃培养箱，一段时间后镜下观察，待细胞完全变圆、脱落，轻轻拍打底部和侧面，加入2 mL FBS（#0500）终止消化，将细胞悬液转移至15 mL离心管中，1000 rpm离心5 min，用新培养基重悬细胞沉淀后计数，根据5000 cells/cm2的密度传代至预先用PLL包被的培养瓶中。
生长条件：在CO2浓度为5%，温度为37℃，相对湿度（RH）为95%的细胞培养箱中培养。
表1 HTMC培养材料
参考文献
[1] Stamer WD, Acott TS. (2012) “Current understanding of conventional outflow dysfunction in glaucoma.” Curr Opin Ophthalmol. 23: 135-43.
[2] Llobet A, Gasull X, Gual A. (2003) “Understanding trabecular meshwork physiology: a key to the control of intraocular pressure?” News Physiol Sci. 18: 205-9.
其他细胞品类
别划走，精彩继续
长按识别
添加一对一专属技术支持
扫码进群
咨询详细产品信息
点在看，传递你的品味
