【ScienCell】人主动脉外膜成纤维细胞（HAAF）产品使用攻略

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人主动脉外膜成纤维细胞 HAAF 人原代细胞 Human Primary cells 心脏细胞系统 Cardiac Cell System Sciencell Aortic Adventitial Fibroblasts Fibroblast Medium 2331

小白求助前辈指路

人主动脉外膜成纤维细胞培养不成功、实验做不出来怎么办？新手小白迫切求助，希望各位前辈在文章下方留言，分享自己的经验，为小白们答疑解惑！

人主动脉外膜成纤维细胞

（HAAF）

血管外膜中，外膜成纤维细胞（AF）通过产生胶原蛋白提供结构支持，最外层的结缔组织覆盖血管，将血管锚定到附近的组织中。AF是血管壁中第一个对高血压和血管损伤刺激作出反应并进行增殖的细胞。在病理情况下，AF产生细胞因子和趋化因子，诱导免疫细胞大量浸润到血管壁的外膜层中，进而引发外膜炎症，并可能导致心血管疾病。AF的培养是研究心血管疾病发病机制和开发新的疾病治疗方法的理想工具。HAAF分离自人主动脉，其fibronectin特异性抗体免疫荧光染色呈阳性。

培养方式

培养瓶：PLL（多聚-L-赖氨酸）包被的培养瓶。

培养基：HAAF用提供的FM-2完全培养基（包括基础培养基、5% FBS、1% FGS-2和1% P/S）培养。

操作步骤：

1) 包被PLL（2 μg/cm²）培养瓶（T-75培养瓶）的准备：将10 mL无菌水加入到T-75培养瓶中，加入15 μL聚-L-赖氨酸原液，轻轻吹匀后将培养瓶放置在37°C的孵育箱中过夜（或至少1小时）。

2) 无菌水清洗包被PLL的T-75 2次，加入20 mL完全培养基，将解冻后的HAAF加入至包被的T-75中，十字交叉法轻柔摇晃培养瓶使细胞分布均匀，将培养瓶放入细胞培养箱中。（注：不建议在解冻后稀释和离心细胞，因为这些操作对细胞的伤害比培养中残留的二甲基亚砜（DMSO）的影响更大。同时，将细胞置于PLL涂层培养有助于促进细胞附着。）

换液：为了获得最佳结果，在培养开始后至少16小时内不要干扰培养。第二天更换培养基，以去除残留的二甲基亚砜和未附着的细胞，之后每隔三天更换一次培养基，直到培养达到约70%的密度，一旦培养达到约70%的密度，每隔一天更换一次培养基，直到培养达到约90%的密度。

传代：当细胞密度达到95%时进行传代。

1) 将T/E、DPBS、培养基提前置于室温平衡（不建议37℃加热）。

2) 弃除旧培养基，并用DPBS清洗细胞后吸除加入5 mL DPBS和5 mL 0.05% T/E solution 轻柔晃动培养瓶后放入37℃培养箱（注：原代细胞传代时请勿使用未稀释的胰蛋白酶），一段时间后镜下观察，待细胞完全变圆、脱落，轻轻拍打底部和侧面，加入5 mL FBS（#0500）终止消化，将细胞悬液转移至15 mL离心管中，1000 rpm离心5 min，用新培养基重悬细胞沉淀后计数，根据5000 cells/cm²的密度传代至预先用PLL包被的培养瓶中。

生长条件：在CO₂浓度为5%，温度为37℃，相对湿度（RH）为95%的细胞培养箱中培养。

表1 HAAF培养材料

参考文献

[1] Stenmark KR, Yeager ME, El Kasmi KC, Nozik-Grayck E, Gerasimovskaya EV, Li M, Riddle SR, Frid MG. (2013) “The adventitia: essential regulator of vascular wall structure and function.” Annu Rev Physiol. 75: 23-47.

[2] Maiellaro K, Taylor WR. (2007) “The role of the adventitia in vascular inflammation.” Cardiovasc Res. 75: 640-8.

[3] Tieu BC, Ju X, Lee C, Sun H, Lejeune W, Recinos A 3rd, Brasier AR, Tilton RG. (2011) “Aortic adventitial fibroblasts participate in angiotensin-induced vascular wall inflammation and remodeling.” J Vasc Res. 48: 261-72.

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