【ScienCell】人主动脉内皮细胞(HAEC)产品使用攻略

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小白求助前辈指路

人主动脉内皮细胞培养不成功、实验做不出来怎么办？新手小白迫切求助，希望各位前辈在文章下方留言，分享自己的经验，为小白们答疑解惑！

人主动脉内皮细胞

(HAEC)

主动脉是人体中最大的动脉，将富含氧的血液从心脏分配到全身各个部位。主动脉内皮细胞（AEC）位于血管壁内，不断受到高血流剪切应力的作用，诱导内皮源性物质的产生，调节血管收缩和血管生长。AEC还调节细胞粘附分子的表达，以控制和微调炎症反应和纤溶作用。这些生理特性使得AEC培养在研究内皮功能障碍机制、血管疾病和动脉粥样硬化的发病机制以及新型疾病治疗的发展中得到广泛应用。HAEC的vWF/Factor VIII和CD31 (PECAM1)特异性抗体免疫荧光染色呈阳性。

培养方式

培养瓶：包被纤连蛋白（Bovine Plasma Fibronectin，2 µg/cm²）的培养瓶。

培养基：HAEC用提供的ECM完全培养基（包括基础培养基、2% FBS、1% ECGS和1% P/S）培养。

操作步骤：

1) 包被纤连蛋白（2 µg/cm²）培养瓶的准备（T-75培养瓶）：将5 mL无菌的Dulbecco's磷酸盐缓冲盐（DPBS）与150 µL纤连蛋白原液混匀后加入到T-75培养瓶中，将培养瓶放置在37°C的孵育箱中过夜（或至少2小时）。在铺细胞前将未凝固纤连蛋白溶液吸出（可重复使用2次），加入20 mL ECM完全培养基（基础培养基、FBS、ECGS和P/S按比例混合配制）。

2) 将解冻后的HAEC加入培养瓶，十字交叉法轻柔平晃培养瓶，使细胞分散均匀。（注：不建议在解冻后对细胞进行稀释和离心，因为这些与培养物中残留DMSO的作用相比，这些作用对细胞的损伤更大；将HAEC置于纤连蛋白包被的培养瓶中，促进生长同样重要。）

换液：培养开始后16小时内不要干扰培养。次日更换培养液，去除残留的DMSO和未贴壁细胞。之后每三天更换一次培养基，直到培养达到大约70%的密度。一旦培养达到大约70%的密度，每隔一天更换一次培养基，直到培养达到大约90%的密度。

传代：当细胞密度达到90%时进行传代。

1) 将T/E、包被培养瓶皿、DPBS、培养基提前置于室温平衡（不建议37℃加热）。

2) 弃除旧培养基，并用DPBS清洗细胞后吸除加入8 mL DPBS和2 mL 0.05% T/E solution 轻柔晃动培养瓶后放入37℃培养箱（注：原代细胞传代时请勿使用未稀释的胰蛋白酶），一段时间后镜下观察，待细胞完全变圆、脱落，轻轻拍打底部和侧面，加入2 mL FBS，将细胞悬液转移至15 mL离心管中，1000 rpm离心5 min，用新培养基重悬细胞沉淀后计数，根据5000-7000 cells/cm²的密度传代至预先用纤连蛋白包被的培养瓶中。

生长条件：在CO₂浓度为5%，温度为37℃，相对湿度（RH）为95%的细胞培养箱中培养。

表1 HAEC培养材料

参考文献

[1] Ando J, Kamiya A. (1996) “Flow-dependent regulation of gene expression in vascular endothelial cells.” Heart J. 37: 19-32.

[2] Cines DB, Pollak ES, Buck CA, Loscalzo J, Zimmerman GA, McEver RP, Pober JS, Wick TM, Konkle BA, Schwartz BS, Barnathan ES, McCrae KR, Hug BA, Schmidt AM, Stern DM. (1998) “Endothelial cells in physiology and in the pathophysiology of vascular disorders.” Blood. 91: 3527-61.

[3] Liu JW, Wei DZ, Du CB, Zhong JJ. (2003) “Enhancement of fibrinolytic activity of bovine aortic endothelial cells by ginsenoside Rb2.” Acta Pharmacol Sin. 24: 102-8.

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