【ScienCell】人肝源间充质干细胞（HMSC-he）产品使用攻略
人肝源间充质干细胞培养不成功、实验做不出来怎么办？新手小白迫切求助，希望各位前辈在文章下方留言，分享自己的经验，为小白们答疑解惑！
人肝源间充质干细胞
（HMSC-he）
间充质干细胞（MSC）是一类经过充分表征的成体干细胞群体，有潜力发展成为产生脂肪、软骨、骨骼、肌腱和肌肉的成熟细胞，并由于MSC的发育可塑性，引发人们将对MSC应用于在再生医学的巨大兴趣。在转化生长因子存在的无血清培养条件下，MSC可以分化为软骨细胞；而在存有在抗坏血酸和地塞米松的血清培养条件下，MSC可以分化为成骨细胞。MSC具有自我更新和分化为各种间充质组织谱系的能力，有潜力被移植到受伤部位或种植在仿生支架上，以生成适当的组织结构。
人肝间充质干细胞（Human Hepatic Mesenchymal Stem Cells）可以从人肝脏组织中分离和提取得到，这些细胞存在于肝脏的间质组织中。人肝间充质干细胞具有多向分化潜能，可以分化为多个不同的细胞类型，如肝细胞、胆管细胞、间充质细胞等，并可以不断地进行增殖和分化，以保持其干细胞特性和功能。
人肝间充质干细胞具有免疫调节作用，可调节免疫反应并抑制炎症反应，从而具有潜力用于治疗免疫相关疾病，且这些细胞在肝脏损伤和疾病时具有组织修复和再生的能力，可以参与肝脏组织的修复过程。由于其特殊的来源和功能，人肝间充质干细胞在肝脏再生医学和治疗肝脏疾病方面具有广阔的应用前景。HMSC-he的CD73、CD90特异性抗体免疫荧光染色呈阳性，成脂分化后的油红O染色呈阳性，成骨分化后的茜素红染色呈阳性。
培养方式
培养瓶：纤连蛋白（Bovine Plasma Fibronectin, 2 µg/cm2）包被培养瓶。
培养基：HMSC-he在所提供的MSCM完全培养基（含基础培养基，5% FBS、1% MSCGS、1% P/S）中培养。
操作步骤：
1) 包被纤连蛋白（2 µg/cm2）培养瓶的准备（T-75培养瓶）：将10 mL无菌的Dulbecco's磷酸盐缓冲盐（DPBS）与150 µL纤连蛋白原液混匀后加入到T-75培养瓶中，将培养瓶放置在37°C的孵育箱中过夜（或至少2小时）。在铺细胞前将未凝固纤连蛋白溶液吸出（可重复使用2次），加入20 mL完全培养基（T-75培养瓶）。
2) MSCM完全培养基的配制：用移液管将恢复至室温的FBS（#0025）、MSCGS补充剂轻轻摇晃后全部转移到基础培养基中，并用培养基清洗补充管以恢复整个体积，然后摇晃以混匀完全培养基。
3) 吸出未凝固的纤连蛋白溶液，T-75中加入20 mL的完全培养基，将解冻后的细胞小心加入到培养基中，十字交叉法轻柔平晃培养瓶。（注：不建议在解冻后对细胞进行稀释和离心，因为这些与培养物中残留DMSO的作用相比，这些作用对细胞的损伤更大；将HLEC置于纤连蛋白包被的培养瓶中，促进生长同样重要。）
换液：培养开始后16小时内不要干扰培养。次日更换培养液，去除残留的DMSO和未贴壁细胞。之后每三天更换一次培养基，直到培养达到大约70%的密度。一旦培养达到大约70%的密度，每隔一天更换一次培养基，直到培养达到大约90%的密度。
传代：当细胞密度达到90%时进行传代。
1) 将T/E、包被培养皿、DPBS、培养基提前置于室温平衡（不建议37℃加热）。
2) 弃除旧培养基，并用DPBS清洗细胞后吸除加入5 mL DPBS和5 mL 0.05% T/E solution 轻柔晃动培养瓶后放入37℃培养箱（注：原代细胞传代时请勿使用未稀释的胰蛋白酶），一段时间后镜下观察，待细胞完全变圆、脱落，轻轻拍打底部和侧面，加入2 mL FBS，将细胞悬液转移至15 mL离心管中，1000 rpm离心5 min，用新培养基重悬细胞沉淀后计数，根据5000 cells/cm2的密度传代至预先用纤连蛋白包被的培养瓶中。
生长条件：在CO2浓度为5%，温度为37℃，相对湿度（RH）为95%的细胞培养箱中培养。
表 1 HMSC-he培养材料
参考文献
[1] Machaj E K, Grabowska I, Gajkowska A, et al. Differentiation potential of the fetal rat liver-derived cells[J]. Folia Histochemica et Cytobiologica, 2005, 43(4): 217-222.
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