【ScienCell】ScienCell相关问题及解答（一）——原代细胞
1. 原代细胞和细胞系有什么区别？
原代细胞直接来源于组织，在培养中，原代细胞寿命有限。原代细胞具有许多在体内可见的标记物，因此受到青睐。细胞系是一群细胞，可以持续增殖和复制，并经历了基因转化，因此具有无限增殖的潜力，可以经过很高数量的传代培养，而在非常高的传代数中可能发生进一步的基因型或表型变化。一般来说，细胞系缺乏在体内可见的许多标记物，并且与原代细胞的标记物表达有很大的差异。
2. ScienCell是如何确认细胞类型的？
细胞类型可以通过多种方式进行确认。包括非常重要的细胞形态学，可以帮助我们识别正确的细胞。此外，ScienCell质量控制部门使用免疫荧光来确认特定细胞类型的标记物的存在。免疫荧光还可以用于识别污染细胞。
3. 关于ScienCell的细胞批次，可以获取哪些关于供体的信息？
ScienCell保留所有人类和动物原代细胞的记录。如果您有特定的要求（年龄和/或性别），请在订购前与我们的客户服务部门联系。
4. ScienCell对细胞进行人类白细胞抗原（HLA）分型吗？
人类白细胞抗原（HLA）分型是一种确定一个人的组织与另一个人的组织有多么相似的方法。目前ScienCell在ScienCell Research Laboratories不进行此项测试。
5. ScienCell的原代细胞是100%纯净的吗？
原代细胞永远不会是100%纯净的，但ScienCell会尽量使细胞尽可能纯净。总会存在一些污染细胞。
6. 开始使用正常原代细胞需要多少经验？
强烈建议在无菌条件下使用层流罩进行工作，并最好有其他细胞类型的工作经验。如果您是细胞培养的初学者或想建立一个细胞培养实验室，我们可以提供帮助。请联系我们的细胞培养专家。
7. 收到冷冻保存的细胞后，应该如何处理？
收到包裹后，立即将冷冻保存的细胞从干冰运输容器转移到液氮中，以防止细胞解冻。不要将细胞存储在-20°C或-80°C，因为这会对细胞造成不可逆的损伤。
8. 首次培养冷冻保存的细胞时，是否需要离心去除二甲基亚砜（DMSO）？
ScienCell不建议离心细胞以去除DMSO残留物。离心过程对细胞的伤害可能比DMSO残留物更大，特别是如果使用不适当的高速离心。当您培养细胞时，DMSO在培养基中会被充分稀释。例如，如果您在T-75培养瓶中用15 ml培养基培养整个冷冻管（1毫升）的细胞，DMSO浓度将低于0.67%（体积/体积）。如果您以5000-10000 cells/cm2的密度培养细胞，DMSO的浓度将更低。
9. 应该使用什么类型的培养箱来培养ScienCell的原代细胞？
ScienCell建议使用37°C，5% CO2培养箱来培养ScienCell的所有原代细胞。所有ScienCell培养基都需要5% CO2来维持细胞的最佳pH值。
10. 如何复苏冻存的细胞，并建立培养物？
注意：请参考细胞产品说明书中的详细说明。
1) 从液氮中取出细胞冻存管，注意保护手和眼睛。
2) 松开细胞冻存管的盖子1/4转10秒钟，以释放可能陷入螺纹中的液氮，然后重新拧紧盖子。
3) 将冻结的细胞冻存管放入37°C的水浴中。轻轻地握住和旋转细胞冻存管，直到内容物完全解冻。迅速从水浴中取出细胞冻存管，用70%乙醇擦拭干净，并转移到无菌区域。
4) 小心地取下盖子，不要触摸内部螺纹。轻轻悬浮和分散细胞冻存管中的内容物到经平衡的聚-L-赖氨酸或纤维连接蛋白涂层的培养器皿中（请参考产品说明书上的具体说明）。并轻轻晃动培养器皿使细胞均匀分布。必要时松开盖子以允许气体交换。
5) 将培养器皿放回培养箱中（37°C、5% CO2和95%空气）。为了获得最佳结果，在培养开始后至少16 h内不要干扰培养物。第二天更换培养基，以去除残留的DMSO和未附着的细胞（除非产品说明书上另有说明）。
11. 应该向细胞培养瓶中加入多少培养基？
建议向T-25培养瓶中添加5 ml培养基，向T-75培养瓶中添加15 ml培养基，向T-150培养瓶中添加30 ml培养基。
12. 应该多久更换一次原代细胞的培养基？
请参考您正在使用的细胞类型的产品说明书以获取特定的说明。一般来说，根据细胞的汇合度，培养基应该每2-3天更换一次。注意：在解冻和培养冻存细胞后，第一次更换培养基应该在约16 h后进行，以去除DMSO残留和死细胞。
13. 细胞应该在什么程度汇合度下进行传代？
这取决于细胞类型。例如，内皮细胞不应该过于密集（90%-100%），因为这会促进污染细胞的生长并导致内皮细胞老化。另一方面，成纤维细胞可以在较高的汇合（90%-98%）下进行亚培养，而不会受到较高汇合度的不良影响。总的来说，原代细胞不应该过度密集，因为这可能导致细胞老化和污染细胞的生长。
14. 正常原代细胞的推荐分裂比是多少？
ScienCell研究实验室不推荐正常细胞的分裂比，因为胰蛋白酶消化后的细胞数量是变化的。建议在胰蛋白酶消化后进行细胞计数，并按照产品说明书中针对特定细胞类型的播种密度进行细胞播种。
15. 细胞倍增和传代次数有什么区别？
细胞倍增是培养物中细胞总数的两倍增加，通常是在指数生长期或“对数”期间。传代次数是指细胞群体从培养器皿中取出并经历传代过程的次数，以使细胞保持足够低的密度以促进进一步生长。
16. 可以对正常原代细胞进行多少次传代？
ScienCell不使用“传代”这个术语来描述生长潜力，因为每个客户使用的分裂比不同。ScienCell研究实验室在细胞产品说明书上指出了预期的细胞倍增次数。
17. 非增殖细胞可以进行传代培养吗？
非增殖细胞不能进行传代培养，因为它们不增殖。这包括以下细胞类型：神经元、寡突胶质细胞、巨噬细胞和其他一些细胞类型。产品说明书将是否为非增殖性细胞。
18. 可以重新冻存ScienCell的正常原代细胞吗？
不建议客户重新冻存ScienCell的人类和动物原代细胞。
19. 可从哪家公司获得ScienCell的正常野生型小鼠和大鼠？
Charles River Laboratories International
20. ScienCell的大鼠细胞使用哪个品系的大鼠，遗传背景是什么？
使用从Charles River获得的CD IGS大鼠，它们是一种杂种大鼠品系。IGS指的是使用Charles River国际遗传标准系统繁殖的动物。
21. CD-1小鼠和C57BL/6小鼠有什么区别？
CD-1 IGS小鼠是杂种小鼠，源于瑞士洛桑抗癌中心培育的一群杂种瑞士小鼠。它们于1926年进口到美国，1959年进口到Charles River。C57BL/6小鼠是由C.C. Little于1921年在巴西应用生物学研究所培育的近交小鼠。C57BL/6小鼠因用于转基因/敲除模型的开发（野生型小鼠作为良好的对照）而受到欢迎。
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