【BioLegend】CD3/CD28 T 淋巴细胞刺激剂

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BioLegend 100339 100340 100359 100360 100371 100372 102115 102116 102121 102122 102131 102132 317325 317326 317347 317348 317349 317350 302933 302934 302943 302944 302959 302960

T 细胞表面重要的CD3分子，与T细胞表面识别受体（TCR）结合形成TCR-CD3 复合体，接受MHC分子递呈的抗原肽，传递 T 细胞活化的第一信号，而CD28作为协同刺激分子，与 APCs 细胞表面的B7家族分子结合，传递 T细胞活化的第二信号，从而使得T细胞充分活化、增殖实行免疫功能。

▍▏小鼠 CD3/CD28 T 淋巴细胞刺激剂

在一项研究髓源抑制性细胞（MDSCs）的积累会抑制 CD3/CD28 诱导的 T 细胞扩增的实验中验证 CD3/CD28 的激活 T 细胞的功能。

实验样本：

C57BL/6 小鼠，8 周龄，取小鼠骨髓，培养纯化得到 BM - MDSCs，取小鼠脾脏、淋巴结分离纯化 CD4+T 细胞

实验方案：

实验组：将CFSE染色的CD4+T 细胞（2*10^5 cells/well）加入到2ug/mlCD3ε（clone:145 - 2C11）抗体包被的 96 孔板中，并向细胞中游离着加入1ug/ml的CD28（clone:37.51）抗体，培养72h（d3）后收集 CD4+T 细胞

对照组：将CFSE 染色的CD4+T细胞（2*10^5 cells/well）加入到 96 孔板中，培养 72h（d3）后收集细胞

CFSE染色：分离纯化的CD4+T细胞中加入0.5uM 的 CFSE，室温避光孵育20分钟，用培养基清洗并重悬细胞

CD3/CD28 刺激细胞扩增：

细胞共培养：实验组细胞培养到第 4 天，加入纯化的 BM - MDSCs 共培养三天后，收集细胞

参考文献：Rachel V. Jimenez, Valeriya Kuznetsova et al. C-Reactive Protein Promotes the Expansion of Myeloid Derived Cells With Suppressor Functions. (2019)

产品信息

产品名称	克隆号	货号	规格
Ultra-LEAF™ Purified anti-mouse CD3ε Antibody	145 - 2C11	100339/100340/100359/100360/100371/100372	100μg/1mg/5mg/25mg/50mg/100mg
Ultra-LEAF™ Purified anti-mouse CD28 Antibody	37.51	102115/102116/102121/102122/102131/102132	100μg/1mg/5mg/25mg/50mg/100mg

▍▏人 CD3/CD28 T 淋巴细胞刺激剂

案例一：

一项研究高剂量的抑制剂（TMPA 和 THPN）对 PBMC 刺激后增殖具有抑制作用，而低剂量对 PBMC 的扩增没有抑制作用的实验，方案如下：

CFSE 染色：淋巴细胞分离液分离人外周血的PBMC，调节细胞浓度 3*10^6/ml，加入 CFSE 进行染色，CFSE 的终浓度为5uM，37°C 孵育 10 分钟后用冷的完全培养基清洗，并调整细胞浓度为 2.5*10^6/ml。

CD3/CD28 刺激细胞扩增：

NS组：细胞培养板中加入 200ul CFSE 染色的细胞悬液，培养 7 天。

aCD3/CD28组：细胞培养板中加入200ulCFSE染色的 PBMC，加入CD3（clone:OKT3）、CD28 (clone:28.2) 抗体，终浓度均为5ug/ml，另外加入200IU/ml的 IL-2，培养 7 天。

aCD3/CD28+TMPA/THPN 低剂量组：细胞培养板中加入 200ul CFSE 染色的 PBMC，加入10uM的TMPA或者1uM 的THPN抑制剂，5分钟后加入CD3（clone:OKT3）、CD28(clone:28.2)抗体，终浓度均为5ug/ml，另外加入 200IU/ml的IL-2，培养7天。

aCD3/CD28+TMPA/THPN高剂量组：细胞培养板中加入 200ul CFSE 染色的 PBMC，加入50uM的TMPA或者 10uMd的THPN抑制剂，5分钟后加入CD3（clone:OKT3）、CD28 (clone:28.2) 抗体，终浓度均为 5ug/ml，另外加入200IU/ml的IL-2，培养7天。

参考文献：Modulation of T-cell apoptosis by small molecule compounds targeting the nuclear orphanreceptor Nur77.(2018)

案例二：

使用 CD3/CD28 刺激 T 细胞，观察不同时期 T 细胞的扩增。

外周血单个核细胞从健康献血者或老年癌症患者的全血中分离，培养在预包被 CD3 抗体 (5 μg/mL, Biolegend) 和 CD28 抗体 (5 μg/mL, Biolegend)，IL-2 (100U/mL) 的体系中，每 3 天加入含 IL-2 的新鲜培养基，整个培养期间细胞密度保持在 2.5 × 10 个细胞 /ml 以下。对照组仅添加 IL-2 的 T 细胞培养。活细胞计数采用台盼蓝排除法用血细胞计人工计数。

参考文献：T cell stimulation and expansion by SunTag-based clustering of anti- CD3/CD28 scFv.(2020)

产品信息

产品名称	克隆号	货号	规格
Ultra-LEAF™ Purified anti-human CD3 Antibody	OKT3	317325/317326/317347/317348/317349/317350	100μg/1mg/5mg/25mg/50mg/100mg
Ultra-LEAF™ Purified anti-human CD28 Antibody	28.2	302933/302934/302943/302944/302959/302960	100μg/1mg/5mg/25mg/50mg/100mg