【Wako】Phos-tag™ 荧光染料

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Phos-tag™ 凝胶荧光染料，是一种可在生理pH范围内，对凝胶中的磷酸化蛋白进行染色的荧光染料。进行了SDS-PAGE，用本产品处理聚丙烯酰胺凝胶，可以对磷酸化蛋白进行特异性染色。

本系列有波长不同的Yellow（黄）、Magenta（品红）、Cyan（蓝绿）、Aqua（浅绿）四种颜色。每管规格为0.2 mg，可对染色约20个迷你凝胶。

购买前请注意：

使用Phos-tag™ 凝胶荧光染料，需要用到Mixed reagents for Phos-tag™ Common Solution 5×（产品编号：383-15231）。请一同购买。

▍▏特点

● 高灵敏度

● 在生理pH下即可染色

● 选择性与pSer、 pTyr、 pHis以及pAsp残基结合

● 无需放射性物质、化学物质标签、抗体

● 2小时内完成染色

▍▏产品对比

其他公司产品A

● 凝胶pH：2~4

● 5个步骤（固定、清洗、染色、脱色、清洗）

● 所需时间：≧5小时

● 溶液更换次数：11次

● 卵清蛋白检测上限：～5 ng/lane

Phos-tag™ Magenda（品红）

● 凝胶pH：7~8（不进行脱磷酸化）

● 3个步骤（固定、染色、清洗）

● 所需时间：≦2小时

● 溶液更换次数：4次

● 卵清蛋白检测上限：～1 ng/lane

▍▏应用实例①

磷酸化蛋白与非磷酸化蛋白的染色Phos-tag™ Aqua（浅绿）

Lane.No.（）内为磷酸基团数目

1. Marker

2.α-酪蛋白（9P）

3.经ALP处理的α-酪蛋白

4.β-酪蛋白（5P）

5.经ALP处理的β-酪蛋白

6.卵清蛋白（2P）

7.经ALP处理的卵清蛋白

8.胃蛋白酶（1P）

9.经ALP处理的胃蛋白酶

10.β-半乳糖苷酶

11.牛血清白蛋白

12.碳酸酐酶

Phos-tag™ Aqua（浅绿）染料选择性：用Phos-tag™ Aqua（浅绿）对10％（w/v）的PAGE胶进行染色，其中分别含有四组完整的以及经ALP（碱性磷酸酶）处理的磷酸蛋白（α-酪蛋白，β-酪蛋白，卵清蛋白和胃蛋白酶各1 μg）（左），然后使用考马斯亮蓝CBB G-250染色（右）。

成功特异性地检测出SDS-PAGE后的磷酸化蛋白。

数据提供：广岛大学研究生院医学系科学研究科医药分子机能科学研究室木下惠美子老师、木下英司老师、小池透老师

▍▏应用实例②

使用Phos-tag™ 荧光凝胶染料的组氨酸、天门冬氨酸的磷酸化分析

细菌通过将信息从组氨酸激酶EnvZ传递到应答调控子OmpR来调节基因的表达。分别分析有自磷酸化能力的EnvZ激酶和被EnvZ催化的OmpR中组氨酸和天门冬氨酸的磷酸化。

可以确认Phos-tag™ Magenta（品红）和Phos-tag™ SDS-PAGE 这两种试剂中的His和Asp的磷酸化随激酶的处理时间经过不断增强。尤其是使用Phos-tag™ Magenta（品红）时，可以仅检测出His磷酸化或Asp磷酸化。

数据提供：广岛大学研究生院医学系科学研究科医药分子机能科学研究室木下惠美子老师、木下英司老师、小池透老师

▍▏应用实例③

用于筛选组氨酸激酶抑制剂（新型抗生素）

使用Phos-tag™ 荧光凝胶染料，筛选组氨酸激酶抑制剂。

证实磷酸化依赖组氨酸激酶抑制剂浓度被抑制。

数据提供：广岛大学研究生院医学系科学研究科医药分子机能科学研究室木下惠美子老师、木下英司老师、小池透老师

参考文献

“Quantitativemonitoring of His and Asp phosphorylation in a bacterial signaling system byusing Phos-tag Magenta/Cyan fluorescent dyes”, Emiko Kinoshita-Kikuta, HiroshiKusamoto, Syogo Ono, Keisuke Akayama, Yoko Eguchi, Masayuki Igarashi, ToshihideOkajima, Ryutaro Utsumi, Eiji Kinoshita, Tohru Koike, Electrophoresis, 2019

▍▏使用方法